论文部分内容阅读
姜黄素作为抗肿瘤药物的研究已有近30年，其溶性不佳以及靶点众多是影响其体内抗肿瘤活性的主要原因。前期研究中，我们合成了一系列姜黄素的类似物，发现其水溶性和对硫氧还蛋白还原酶（TrxR）活性的抑制能力都高于姜黄素本身。本文通过体外研究模型探索了姜黄素类似物B5抗宫颈癌的活性以及其作用机制。这为姜黄素类似物的开发以及新型TrxR抑制剂的研究丰富了内容。通过细胞体外培养和MTT检测，选择了CaSki和SiHa两株宫颈癌细胞作为研究模型。通过流式细胞仪检测了B5对CaSki和SiHa细胞周期的阻滞和诱导细胞凋亡的作用；通过Westen Blot检测了B5对凋亡相关蛋白的影响；通过DCFH-DA探针检测了B5诱导CaSki和SiHa细胞株中ROS的积累情况；通过JC-1探针检测了B5诱导CaSki和SiHa细胞株线粒体膜电位的变化；并进一步验证了B5在细胞内对Trx系统的影响。结果：姜黄素类似物B5具有显著的体外抗肿瘤活性，其对CaSki和SiHa两株细胞的IC50值分别为5.3μM和6.2μM左右，远低于姜黄素对这两株细胞的IC50值（姜黄素对两株细胞的IC50值分别为B5的4.5倍和3.6倍）。并且这种抑制作用具有浓度依耐性。B5能诱导CaSki和SiHa细胞凋亡以及G2/M期细胞周期阻滞；B5诱导了两株细胞中ROS呈时间依赖性的积累，以及氧化状态的硫氧还蛋白（Trx）呈浓度依赖性的积累。进而B5诱导两株细胞中线粒体膜电位下降和线粒体损伤。B5能够呈浓度依赖性的促进Caspase-3、8、9的切割活化，PARP的切割以及XIAP的抑制。结论：姜黄素类似物B5具有显著的体外抗肿瘤活性。其体外抗肿瘤活性的机制为：通过抑制TrxR酶活性，诱导细胞产生氧化应激，造成细胞线粒体损伤，最终诱导肿瘤细胞进入凋亡程序。