青花菜（Brassica oleracea.L.var.italica)属于十字花科芸薹属甘蓝种的一个变种，异花授粉植物，杂交育种是其主要的育种方式。为获得稳定遗传的高代自交系，通常需要6-8代的连续蕾期自交。通过游离小孢子培养技术，在2年内可获得纯合的自交系材料，缩短了育种年限，加快了育种进程。小孢子出胚情况受基因型、温度预处理及植株生长状况等内外因素的影响，从而限制了游离小孢子培养技术在育种工作中的广泛应用。研究小孢子胚胎发生的途径、不同温度预处理条件下小孢子的出胚率和胚胎发生的分子机理，对加快小孢子培养技术在育种的应用进程，提高育种效率，具有重要理论意义和应用价值。本研究以青花菜B908（易出胚）和B1092（不易出胚）为实验材料，通过显微观察、qPCR、RACE以及转录组测序等方法，从细胞和分子两个层次对温度对小孢子胚胎发生的影响和机理进行了研究，获得主要研究结果如下：1．4℃、32.5℃、4℃+32.5℃（组合处理）等不同温度预处理条件下，小孢子胚胎发生途径基本相同，均以对称分裂产生胚胎的孢子体发育途径为主（B途径），经历球型胚、心型胚、鱼雷胚，最终形成子叶型胚状体。但不同温度预处理条件下，小孢子启动胚胎发生的频率不同，从成胚率来看，4℃+32.5℃组合处理后的成胚率最高。2．TDF4、TDF9、TDF19、TDF20、TDF25与BBM基因在不同温度预处理条件下，小孢子胚胎发生早期不同发育阶段的表达模式不同，TDF19的表达模式与BBM基因相似，在32.5℃高温及4℃+32.5℃4组合处理后表达量升高，两者相关系数为0.76。3．克隆获得了一个与青花菜小孢子胚胎发生相关的基因（TDF19)，该基因全长为2283bp，编码760个氨基酸，预测等电点为6.11，分子量为85.5KD。预测该基因二级结构中包含了-螺旋，-转角，无规则卷曲等结构，预测三级结构中包含3个结构模块，其中第一个结构中包含2个Zn结合位点，通过序列分析，推测该基因的编码蛋白属于蛋白激酶。4．对25℃（对照）、4℃、32.5℃、4℃+32.5℃（组合处理）不同温度预处理下的4个样品进行转录组测序，分别获得了56784407、52339892、68744711、73345307条高质量reads；通过将不同处理与对照样品比较，结果显示4℃低温预处理与对照间表达差异显著的isoform有31个，32.5℃高温处理与对照间表达显著差异的isoform有1281个，4℃+32.5℃组合处理与对照处理间的表达差异显著的isoform有1673个。5．通过KEGG代谢通路富集分析，32.5℃及4℃+32.5℃组合处理样品与对照相比，富集了可能与小孢子胚胎发生密切相关的包含了信号转导及细胞内信号传导、次生代谢产物的合成和代谢、水杨酸和茉莉酸等的刺激反应、脱落酸的信号传导等代谢途径。