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大环内酯类(MALs)抗生素是应用广泛的抗生素之一,它不仅在人类临床医学和畜禽养殖业中作为治疗药物被人们广泛使用,而且还被越来越多地作为饲料添加剂使用。但是,不合理或过量的使用会在环境、动物性食品中造成残留,最后通过食物链进入人体,危害人体的健康。因此,建立灵敏度高的检测方法来监测食品中MALs的残留是非常必要的。为此,本文以替米考星、红霉素、罗红霉素、克拉霉素和泰乐菌素5种MALs为检测物,建立新的检测方法和样品前处理方法。具体的研究内容如下:(1)建立了场放大样品堆积胶束电动毛细管色谱法测定牛奶中5种MALs残留的方法。对影响峰面积、分离度和富集倍数的主要因素进行了优化,优化的运行缓冲液组成为60 mmol/L PBS,5 mmol/L胆酸钠以及1.0 mmol/L CTAB,pH 7.0,分离柱温为25℃,分离电压为20 kV,进样电压为10 kV,时间120 s,检测波长为195 nm。在优化的条件下,替米考星、红霉素、克拉霉素、罗红霉素、泰乐菌素的富集系数分别为866、565、908、702和675,检测限为0.002-0.004 mg/L,加标回收率为72.8%-93.7%。新的方法能够满足中国、欧盟、美国等国家制定的最大残留限量的要求,可应用于牛奶中的MALs残留的检测。(2)建立了沉淀聚合方式制备以红霉素(ERY)和泰乐菌素(TYL)为模板,甲基丙烯酸(MAA)为功能单体,乙二醇二甲基丙烯酸酯(EGDMA)为交联剂的复合模板分子印迹聚合物(MIP)的方法。优化了两模板、功能单体和交联剂之间的比例以及致孔剂的种类、用量,并对合成的MIP的吸附性能进行了表征。得到的最优的制备条件为n(ERY/TYL):n(MAA):n(EGDMA)=1:6:10,其中,n(ERY):n(TYL)=1:1,溶剂为2 m L甲醇/乙腈(1:3,V/V),引发剂为0.02 g偶氮二异丁腈(AIBN),聚合条件是60℃下反应24 h。MIP对ERY的高亲和结合位点和低亲和结合位点的平衡常数(Kd)分别为1.379 mmol/L和4.630 mmol/L,最大的表观吸附量分别为135.466μmol/g和291.907μmol/g;而对TYL的高亲和结合位点和低亲和结合位点的Kd分别为3.650 mmol/L和17.857 mmol/L,最大的表观吸附量分别为138.704μmol/g和523.054μmol/g。印迹效果评价指标IPB值分别为93.534%和125.856%,并且在重复使用10次后也能保持很好的吸附性能。(3)以红霉素和泰乐菌素的复合模板MIP为填料制备了分子印迹固相萃取柱,建立了基于此的牛奶样品前处理的方法。优化得到的使用条件为:上样溶剂为20%乙腈-水;上样体积是5 m L;淋洗剂为4 m L的10%甲醇-水;洗脱剂为5 mL的5%氨水-甲醇。替米考星、红霉素、罗红霉素、克拉霉素和泰乐菌素5种MALs的加标回收率为75.3%-94.2%,高于HLB柱,同时与场放大样品堆积胶束电动毛细管色谱法相结合的富集倍数可达2825-4540倍,检出限可达到0.3-0.8μg/L。因此制作的MISPE柱可以应用于牛奶样品的富集和净化前处理中。