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目的： 构建小鼠髓样细胞触发受体-2(The triggering receptor expressed on myeloid cells-2，TREM2)基因过表达和短发卡RNA(short hairpin RNA，shRNA)干扰慢病毒载体，并通过对小鼠BV2小胶质细胞感染进行鉴定。 方法： 1.小鼠TREM2基因过表达慢病毒载体的构建及鉴定 采用聚合酶链反应(PCR)扩增TREM2基因片段，将扩增产物连接至经Age I酶切后的线性化GV358载体，转化至大肠埃希菌DH5α感受态细胞，经PCR方法鉴定正确后行DNA测序比对分析。将测序正确的重组慢病毒质粒和包装质粒共转染至293T细胞进行包装并用荧光法行滴度测定。将成功包装的过表达慢病毒感染小鼠BV2小胶质细胞，Q-PCR检测感染后细胞中TREM2mRNA的表达水平。 2.小鼠TREM2shRNA干扰慢病毒载体的构建及鉴定 针对小鼠TREM2基因设计合成3对shRNA序列，将其分别连接至经双酶切后的线性化GV248载体，转化至大肠埃希菌DH5α感受态细胞，筛选出阳性克隆后通过DNA测序进行鉴定。将测序正确的重组慢病毒质粒和包装辅助质粒共转染至293T细胞进行包装并用荧光法行滴度测定。将成功包装的3种shRNA干扰慢病毒载体分别感染小鼠BV2小胶质细胞，通过Q-PCR和Western blotting分别检测感染后各组细胞中TREM2mRNA和蛋白的表达水平。 结果： 1.小鼠TREM2基因过表达慢病毒载体的构建及鉴定 通过PCR成功获得TREM2基因片段并连接至线性化GV358载体上，通过PCR及DNA测序鉴定均证实重组慢病毒载体携带有正确的TREM2基因。在293T细胞中包装获得慢病毒并用荧光法测定其滴度为2.0×108TU/mL。重组慢病毒载体感染小鼠BV2小胶质细胞后，Q-PCR检测结果显示，与空白对照组和阴性对照慢病毒感染组相比，过表达慢病毒感染组细胞中TREM2基因mRNA的表达水平显著升高(p＜0.05)。 2.小鼠TREM2shRNA干扰慢病毒载体的构建及鉴定 测序证实3种TREM2基因shRNA干扰慢病毒载体均构建成功。在293T细胞中包装获得慢病毒并用荧光法测定病毒滴度分别为4×108TU/mL、4×108TU/mL和5×108TU/mL。重组慢病毒载体感染小鼠BV2小胶质细胞后，Q-PCR和Western blotting检测结果显示，与空白对照组和阴性对照慢病毒感染组相比，3种TREM2基因shRNA干扰慢病毒感染组细胞中TREM2基因mRNA和蛋白的表达水平均下调(p＜0.05），其中GV248-shRNA-TREM2-2感染组的沉默效率最佳，沉默效率达79.7％。 结论： 利用慢病毒载体介导基因过表达以及RNA干扰的方法成功构建了小鼠TREM2基因过表达和shRNA干扰慢病毒载体，并在小鼠BV2小胶质细胞中进行鉴定，为揭示TREM2基因参与晚发型阿尔茨海默病(late-onset Alzheimers disease，LOAD)发生发展的作用机制奠定了实验基础。