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光合作用是生物圈中最重要的化学反应之一。叶绿体是植物进行光合作用的场所,因此,对叶绿体发育过程的研究,将有助于提高绿色植物光能利用率和光合作用效率。拟南芥叶色花斑突变体在研究叶绿体基因功能中有重要的价值。拟南芥花斑突变体variegated2（var2）和pale cress（pac）是两个重要的与叶绿体发育相关的突变体,突变基因分别是VAR2/AtFtsH2和PAC。其中AtFtsH2编码一个位于叶绿体类囊体膜的FtsH家族金属蛋白酶,PAC编码一个叶绿体功能未知的蛋白,而且纯合的pac突变体呈现白化致死的突变表型,这为PAC功能的研究带来了很大的不便。为了阐明PAC蛋白参与调控叶绿体发育的机制,实验室前期利用酵母双杂交系统对PAC的互作蛋白进行了筛选,发现PAC蛋白和VAR2蛋白物理互作。因此本论文通过蛋白互作的相关方法对二者的互作进行了验证,主要取得了如下结果:1.构建原核表达载体pET28a-VAR2714-1995,并在大肠杆菌BL21（DE3）菌株中诱导表达。利用His标签蛋白纯化柱和咪唑洗脱等方法得到了纯度较高的VAR2238-665重组蛋白,并以该蛋白作为抗原对家兔进行了免疫处理,得到了含有VAR2238-665多克隆抗体的抗血清。对抗血清的免疫印迹检测表明,VAR2238-665多克隆抗体可检测原核表达VAR2238-665蛋白。2.通过构建CaMV 35S启动子调控的VAR2过表达材料VAR2OE来进一步证明制备的VAR2238-665抗血清能特异识别植物中VAR2蛋白。这为Co-IP、GST Pull-down等技术验证VAR2和PAC互作提供了实验材料。3.通过构建BiFC载体和拟南芥原生质体瞬时表达实验,验证了 VAR2和PAC之间存在着植物体内相互作用,且二者在叶绿体内发生互作。4.通过酵母双杂交技术检测到PAC与VAR2蛋白的476-665氨基酸区域有明显的互作,即与M41多肽酶结构域互作,且该结构域与蛋白质水解密切相关。综上所述,本论文成功制备了纯度高、特异性强的VAR2238-665多克隆抗体,为通过免疫共沉淀和GST Pull-down等技术验证VAR2和PAC互作创造了条件。同时通过酵母双杂技术检测到PAC蛋白和VAR2蛋白的M41多肽酶结构域互作,为深入研究PAC基因的功能提供了理论依据。