本研究的目的是构建带有IGF-1基因和绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein，简称 GFP)基因的柞蚕核型多角体病毒双启动子转移载体。 首先，根据苜蓿银纹夜蛾和家蚕的核型多角体病毒 IE-1 基因上游序列，设计同源引物，克隆了柞蚕核型多角体病毒 IE-1 基因启动子片段，并与最近登陆在Gene Bank的同源序列比对，结果显示同源性极高，与家蚕和斜纹夜蛾多角体病毒的 IE-1 启动子相比，具有早期基因启动子特点。将IE-1 基因启动子插入到质粒pGFP-N2的GFP基因上游，构建了IE-1/pGFP-N2表达载体。通过转染Hela细胞，在荧光显微镜下观察到绿色荧光蛋白的表达，证明克隆的启动子具有转录活性，表达载体构建成功。IE-1 基因启动子是杆状病毒的极早期基因启动子，侵入细胞后就会迅速激活下游基因表达，有利于快速简便的筛选重组病毒。 其次，选取 SV40 polyA 作为 IG-1 的终止序列，通过PCR对其扩增并构建了它的克隆载体 pMD-SV40 polyA; 以 IE-1/pGFP-N2 为模版，扩增带有IE-1 基因启动子的GFP，使扩增的Pie-GFP两端带有EcoR Ⅰ酶切位点，构建出pMD-Pie-GFP克隆载体。因为IGF-1为小分子肽类活性物质，为了提高它的表达量，构建了IGF-1 串联拷贝数分别为一至四的多拷贝克隆载体 pUC-IGF-1(1-4)-SV40 polyA，本实验利用BamH Ⅰ和aglⅡ是同尾酶，它们作用酶切位点后产生相同的粘性末端序列，并且连接后酶切位点消失的原理，逐步插入IGF-1 得到多拷贝克隆载体。 最后，以 BamH Ⅰ和 EcoR Ⅰ双酶切 IGF-1 拷贝数分别为一至四的克隆载体，以EcoR Ⅰ酶切 pMD-Pie-GFP，回收 IGF-1(1-4)- SV40 polyA 和 Pie-GFP，将这两段基因插到已有的柞蚕核型多角体病毒转移载体pApM的多克隆位点上，其中IGF-1 在 pApM的多角体基因启动子下游，Pie-GFP 在 IGF-1 之后，构建出带有IGF-1 基因和GFP基因的柞蚕核型多角体病毒双启动子转移载体。PCR法筛选出Pie-GFP插入方向正确的双启动子转移载体，该转移载体的突出特点是在筛选重组病毒时，有重组病毒的细胞在荧光显微镜下呈绿色，具有明显的选择标记，使筛选工作简化。