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目的:过敏性紫癜(Henoch Scholein Purpura,HSP)是儿童时期最常见的出血性疾病之一,是一种累及全身多个器官,以小血管炎症为主要病变的系统性血管炎;主要临床表现为:皮肤紫癜、肾炎、消化道出血、关节肿胀等。本病好发于秋冬季节,近几年,发病率逐年上升。大量研究认为,T细胞亚群的功能紊乱及其相关细胞因子的分泌失调在HSP发病机制中起到关键作用;本课题通过流式细胞技术检测儿童过敏性紫癜患者外周血中调节性T细胞(Regulatory T cells,Tregs)和滤泡性辅助T细胞(T follicular helper cells,Tfh)在急性期和恢复期中数量的变化,通过ELISA方法检测患儿血清中Treg细胞和Tfh细胞所分泌的主要细胞因子IL-10和IL-21表达水平的变化,探讨Treg/Tfh细胞及其相关细胞因子在儿童过敏性紫癜发病中所发挥的作用;为进一步深入研究儿童过敏性紫癜发病机制提供研究基础,也为治疗儿童过敏性紫癜提供新的靶点。方法:(1)标本收集,2013年9月-2014年9月在宁夏医科大学总医院儿科住院病房的儿童过敏性紫癜患者30例,采空腹静脉抗凝血6ml作为急性期标本;入院后均给予抗过敏(口服氯雷他定、静滴西米替丁及复方甘草酸酐等)、改善血管通透性(Vit C、芦丁片)、抗血小板聚集(双嘧达莫)等治疗,两周后,皮疹、关节痛、腹痛等临床症状消失,再次采空腹静脉血6ml作为恢复期标本。同时收集30例健康对照儿童外周血6ml,来自宁夏医科大学总院门诊体检中心的健康体检者。(2)收集到的抗凝血,分离血清,1500 r/min,离心20min,ELISA法检测患者血清中IL-10和IL-21在急性期及恢复期中的表达水平。(3)收集到的抗凝血,经密度梯度离心分离外周血单个核细胞(PBMC);检测Treg细胞用anti-human-CD4-V450,anti-human-CD127-PE和anti-human-CD25-APC-CY7流式抗体进行染色;检测Tfh细胞用anti-human-CD4-V450,anti-human-CXCR5-Alexa,anti-human-CXCR5-Fluor®488和anti-human-CD279-Percp-5.5流式抗体进行染色;通过流式细胞仪检测各组Treg细胞(CD4+CD25+CD27low)和Tfh细胞(CD4+CXCR5+CD279+)数量的变化。(4)采用方差分析比较HSP患儿急性期、恢复期之间以及与正常对照组之间细胞因子IL-10和IL-21的表达水平的变化。(5)采用方差分析比较HSP患儿急性期、恢复期之间以及与正常对照组之间Treg细胞和Tfh细胞数量的变化。结果:(1)HSP患儿急性期外周血中的CD4+CD25+T细胞占外周血单个核细胞的比例为(3.284%±0.5897),与健康对照组(8.195%±1.504)相比,明显下降,P<0.01;HSP患儿急性期CD25+CD127LowT细胞在CD4+T细胞中的比例为(3.996%±0.3052),与健康对照组(6.541%±0.6195)相比,明显下降,P<0.01。HSP患儿恢复期外周血中的CD4+CD25+T细胞占外周血单个核细胞的比例为(5.314%±0.6934),与急性期相比,显著升高P<0.05,几乎接近正常对照组的表达水平;CD25+CD127LowT细胞在CD4+T细胞中的比例为(6.121%±0.5195),与急性期相比,明显升高P<0.01,几乎接近正常对照组。(2)HSP患儿急性期外周血中的CD4+CXCR5+Tfh细胞占外周血单个核细胞的比例为(6.310%±1.073),与健康对照组(3.626%±0.4419)相比,明显升高,P<0.05;急性期组CD4+CD279+Tfh细胞的比例为(2.747%±0.4335)与健康对照组的CD4+CD279+Tfh细胞的比例(1.425%±0.2035)相比有明显升高,p<0.05;急性期组CXCR5+CD279+Tfh细胞在CD4+T细胞中的比例为(1.296%±0.1632),与健康对照组(0.6935%±0.1007)相比,明显升高,P<0.01;而HSP患儿恢复期外周血中的CD4+CXCR5+Tfh细胞占外周血单个核细胞的比例为(3.67%±0.7241),与急性期相比,显著降低,P<0.05,而且趋于正常;HSP患儿恢复期组CD4+CD279+Tfh细胞的比例为(1.644%±0.3091)与相对应其急性期相比明显降低,P<0.05;HSP患儿恢复期外周血中的CXCR5+CD279+Tfh细胞占外周血单个核细胞的比例为(0.7788%±0.1409),与急性期相比明显下降,差异显著,P<0.05。(3)HSP患儿急性期血清中IL-10平均表达水平为(29.82±3.89)pg/ml,与健康对照组(62.03±4.16)pg/ml相比,显著下降(P<0.01);恢复期血清中IL-10平均表达水平为(49.00±4.99)pg/ml,与急性期相比,明显升高(P<0.05),与健康对照组相比,差异不显著(P>0.05)。(4)HSP患儿急性期血清中IL-21平均表达水平为(2198±107.7)pg/ml,与健康对照组(1492±181.9)pg/ml相比,显著升高(P<0.01);恢复期血清中IL-21的平均表达水平为(1473±74.4)pg/ml,与急性期相比,显著降低(P<0.01),与健康对照组相比,差异不显著(P>0.05)。结论:HSP患儿急性期外周血中Treg细胞的数量明显降低,同时,血清中IL-10的表达水平也随之降低;恢复期Treg细胞的数量回升,与健康对照组接近,恢复期血清中IL-10平均表达水平升高,接近健康对照组。HSP患儿急性期外周血中,Tfh细胞的数量升高,同时,IL-21的表达水平也升高;而恢复期中Tfh细胞的数量明显降低,接近正常对照组,血清中IL-21的表达水平随之降低。提示:Treg细胞和Tfh细胞及其所分泌细胞因子IL-10、IL-21参与了儿童过敏性紫癜的发生,发展,但其发挥作用的免疫调节机制需要进一步深入研究。