肠出血性大肠杆菌O157:H7(Escherichia coli O157:H7,E.coli O157:H7)是与公共卫生有关的重要的食源性致病菌,对公众的健康造成了巨大的威胁,实现对其准确快速的检测至关重要。利用指数级富集配体的系统进化技术(Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment,SELEX),从人工合成的随机寡核苷酸文库中筛选得到的一段单链DNA或RNA片段称为适配体(aptamer)。适配体能够形成特定的结构,与靶物质高特异性、高亲和力地结合,因此可以作为高灵敏度以及高特异性的识别元件应用于多个领域的检测系统。本研究采用消减(subtractive)Cell-SELEX技术,筛选获得了特异性识别E.coli O157:H7单链DNA(ssDNA)适配体,并且进一步结合纳米磁颗粒建立了水样和食品中E.coli O157:H7的新型检测方法。体外合成中间随机序列为45个碱基,全长88个碱基的单链DNA文库;以E.coli O157:H7为靶细菌,利用消减CELL-SELEX技术经过7轮重复筛选,挑选出与靶细胞结合效率最高的第六轮筛选结合子进行克隆测序。应用软件Chromas和DNAMAN对测序结果进行家族同源性分析和模拟二级结构的分析,筛选出具有代表性的序列人工合成并标记异硫氰酸荧光素(FITC),使用荧光化学分析仪、流式细胞仪以及激光共聚焦显微镜对适配体进行亲和性与特异性测定。筛选得到1条与E.coli O157:H7特异性结合的适配体A46,其解离常数Kd值为82.45±18.46nM(nmol/L)。其次,将适配体A46进行生物素化修饰,然后与链霉亲和素包被的纳米磁颗粒结合,以此作为捕获探针,以荧光FITC标记的适配体A46作为荧光探针,构建了大肠杆菌O157:H7的实际检测应用方法。在最优的实验条件下,E.coli O157:H7检测的线性范围是90~5×104cfu/ml,最低检出浓度是88cfu/ml,实际水样中加标检测率最高为93.95%,实际食品样品中加标检测率最高达到80%以上。