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目的: 通过随机、双盲、对照临床试验探讨抗炎清肺方治疗脓毒症暴喘(急性肺损伤)痰热壅肺证的疗效,并通过动物实验从HSP70对TLRs/NF-κB信号通路的调控探讨抗炎清肺方治疗脓毒症急性肺损伤的作用机制,为此方治疗脓毒症急性肺损伤提供理论依据。 方法: 临床研究:将符合脓毒症暴喘(急性肺损伤)痰热壅肺证的60例患者,随机分为治疗组(抗炎清肺方组)及对照组(安慰剂组)。对照组采用包括吸氧、机械通气、抗感染、营养支持在内的西医常规治疗。治疗组则在西医常规治疗基础上加用抗炎清肺方进行治疗。观察两组患者治疗前后中医证候评分的变化,同时检测两组患者血常规、血气分析、血清HSP70、TLR4、TLR2、NF-κB、TNF-α、IL-1β、IL-6治疗前后的变化,并进行两组间的比较。 实验研究:将50只SD雄性健康大鼠,随机分为正常组、假手术组、模型组、中药组(抗炎清肺方组)、谷氨酰胺组(HSP70诱导剂组),每组10只。采用盲肠结扎穿孔术制备脓毒症急性肺损伤大鼠模型。中药组采用抗炎清肺方中药灌胃,谷氨酰胺组用谷氨酰胺行腹腔注射。行HE病理染色观察各组大鼠肺组织病变情况;采集各组大鼠肺组织,测定肺湿干重比(W/D),用Real-time PCR方法测定HSP70、TLR2、TLR4、NF-κB/p65 mRNA表达量,用Western-bolt法测定HSP70、TLR2、TLR4、NF-κB/p65蛋白表达量;并进行大鼠血气分析及血清TNF-α、IL-1β、IL-6检测。 结果: 临床研究:在中医单证候方面,治疗组与对照组的喘息、咳嗽、咳痰、发热、腹胀、便秘证候评分治疗后较治疗前均有显著下降;而两组间比较,其中主证喘息、咳嗽、咳痰及次证腹胀、便秘证候评分治疗组较对照组下降明显,气急气喘症状较对照组明显改善。两组患者中医证候总评分在治疗后较入组时均有明显的下降,且自第3天起,治疗组患者病情程度分级轻于较对照组,其中医证候评分亦较对照组下降明显。时间因素及治疗因素对患者中医证候评分均具有显著影响,且时间因素及治疗因素之间存在交互作用。依据中医证候疗效标准,治疗组的临床疗效优于对照组。两组患者血气分析中PaO2及氧合指数均较治疗前明显升高,且治疗组于第5天起较对照组升高明显,肺损伤改善程度优于对照组。治疗组患者治疗后血清HSP70水平较治疗前显著增高,并高于对照组。治疗组患者血清TLR2、TLR4、NF-κB、IL-1β、IL-6、TNF-α、CRP水平较治疗前显著下降,且下降程度大于对照组。试验结束后28天随访结果显示两组死亡率之间无统计学差异。 实验研究:肺组织病理结果显示,正常组及假手术组肺组织形态结构正常,模型组可见肺间质水肿明显,炎症细胞大量浸润,肺泡明显减少,肺组织实变明显。中药组及谷氨酰胺组肺组织损伤范围较小,肺泡量较多,水肿及炎症相对较轻。模型组大鼠肺W/D值高于正常组及假手术组,中药组及谷氨酰胺组W/D值较模型组降低。模型组大鼠血气分析PH值、PaO2及SaO2较正常组及假手术组大鼠明显降低,而中药组及谷氨酰胺组则较模型组升高,且中药组PaO2、SaO2较谷氨酰胺组大鼠升高更为明显。模型组大鼠肺组织HSP70mRNA及蛋白表达水平较正常组及假手术组增高,中药组、谷氨酰胺组大鼠肺组织HSP70mRNA及蛋白表达则较模型组上升更为明显,且中药组HSP70mRNA及蛋白的表达量最高。正常组、假手术组大鼠肺组织TLR2mRNA、TLR4mRNA、NF-κB/p65mRNA及蛋白表达水平较低,模型组大鼠其水平则显著升高,而中药组及谷氨酰胺组大鼠肺组织TLR2mRNA、TLR4mRNA、NF-κB/p65mRNA及蛋白表达水平较模型组显著降低,且中药组TLR2mRNA、TLR4mRNA及蛋白表达水平较谷氨酰胺组降低更为明显。模型组大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α含量较正常组、假手术组明显增高,而中药组及谷氨酰胺组大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α含量则较模型组明显降低,且中药组IL-6、TNF-α降低更为明显。 结论: 1.通过临床试验表明,联合应用中药抗炎清肺方治疗脓毒症暴喘(急性肺损伤)痰热壅肺证其疗效优于单纯西医治疗,可更迅速地改善患者喘息、咳嗽、咳痰、腹胀、便秘等临床证候及患者的氧分压、氧合指数水平,减轻肺损伤程度,但尚不能降低其死亡率。 2.通过临床研究及动物实验表明抗炎清肺方治疗脓毒症急性肺损伤,其机制可能与通过上调HSP70表达,抑制TLRs/NF-κB通路,从而减少IL-1β、IL-6、TNF-α等炎症因子释放有关。