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LHON是一种罕见的眼部线粒体疾病，可发生在10-70岁之间，平均发病年龄为27岁，好发于男性，男女比例为3：1，有明显家族史，其基本病变是视乳头周围微血管病变。直到1988年，Wallace提出了线粒体突变是LHON发生的主要原因后，线粒体突变学说逐渐引起广大学者的注意。目前，人mtDNA的11778、3460和14484点突变被认为是LHON的原发性点突变，是LHON患者特有的点突变，在LHON患者中有90％可检测到这三个点突变。 LHON呈现明显的遗传性，在全世界范围内虽然发病率不是很高，但多为青壮年，危害极大，明显影响患者的生活质量，探讨该病的遗传规律，明确该病的发病因素而且，阐明其发病机理，不仅有利于该病的早发现、早治疗和预防，对其他视神经疾病的基础与临床的研究也有着重要的意义。因此，LHON病因的研究一直是当前视神经病领域研究的热点，国内外相关报道日渐增多。但在我国尤其是东北地区对此病的认识和探讨尚处在初级阶段，没有系统的研究。 本研究旨在对我国东北地区LHON患者及其亲属作初步的调查和分析，采用PCR-SSCP技术结合DNA序列测定等方法，探讨三个原发性点突变与LHON的关系，以了解我国LHON的发病特点，为LHON的快速诊断和产前咨询提供一个快速、经济适用的方法。同时，本文还对LHON患者的复合体Ⅰ功能进行了检测，对LHON的发病机理进行初步探讨。 本研究的主要内容及结果如下： 一、线粒体DNA原发性突变的检测 、、/吉林大学博士学位论文 抽取先证者及其一母系血缘亲属经肘静脉采外周静脉血，进行DNA提取，针对线粒体DNA的3460、11778和14484三个位点分别设计引物，进行PCR后，对所得片段分别用BsaHI、SfaM及Suu3AI进行限制性内切酶分析和单链构象分析(SSCP)，最后，对所得的核营酸片段测序，以验证是否存在上述三个突变位点。结果发现: 1、所有83例被临床诊断为LHON先证者中，79例被发现有线粒体基因组DNA的点突变，占95.2%。其中73例为Gll778A位点突变，占88.0%，其中男61人，女12人;1例为G346OA位点突变，占1 .2%，男，23岁;4例为Tll448C位点突变，占4.8%，其中男3人，女1人。未发现有先证者携带两个以上_卜述突变位点。14例散发病例中有9例被查出携带动Gll778A突变，.片64.3%。25例正常对照均未发现有上述三个基因位点突变。 2、SfaNI酶切分析表明，共有73例患者mtDNA有J输N酶切位点的缺失，其中63例有家族史，占86.3%，而患者家属和正常人的SfaN酶切位点均存在。PCR一SSCP分析发现患者PCR产物的迁移率与未病亲属不同，也与正常对照组不同，未发现有异质性存在。对患者mtDNA的PCR产物核二价酸序列分析表明，该组患者在11778位点有G一A突变。 3、有1例LHON患者存在BsaHI酶切位点的缺失。对先证者母系亲属共3人mtDNA PCR产物进行BsaHI酶切检测，均无BsaHI酶切位点缺失。SSCP分析结果表明，先证者mtDNA的PCR产物在聚丙烯酞胺凝胶电泳中的迁移率’衫仁他未病亲属不同。对先证者及其3位末病母系亲属的mtDNA PCR产物核一汁酸序列分析表明在3460位点存在G一A突变。 4、本研究‘卜有3个家系共12人中，有4人发现有Sau3AI酶切位点缺失;SSCP分析发现LHON患者PCR产物在聚丙烯酞胺凝胶中的迁移率与正常不同，无沦患者还是其亲属，均未发现有异质性。ONA序列分吉林大学博士学位论文沙析表明在mtDNA14484位点有T一C突变。 二、氧化磷酸化与LHON 选取含Gll778A突变的LHON患者20例，其正常母系亲属20例及20例无LHON家族史的正常人，征得其知情同意后，抽取肘静脉血，用梯度离心法提取血小板线粒体，对线粒体酶复合体I活性测定，同时用助wry法测定线粒体总蛋白质含量，结果20例正常人复合体I活性为19.34士5.35 nmol/min mgPr，LHON患者的复合体I活性为15.45士3.49nmol/min mgPr，显著低于正常对照组，但LHON母系亲属血中血小板线粒体复合体1的活性却与正常对照组无显著差异。 通过以上研究，我们主要得出以下几个结论: 众所周知，LHON是一种严重影响视功能的线粒体遗传病，在北欧、英国及澳大利亚的LHON家系中有96%的家系携带G346OA、Gll778A、T14484C三个突变位点，在亚洲人群的LHON患者中以Gll778A位点突变最多，占90%以上，而其他两个点突变少见。但我国学者尚未见有3460及14484突变位点的报道。我们的研究结果表明，我国LHON患者以mtDNA的Gll778A位点突变为主，但同时也存在部分G3460A和T14484C位点患者家系，分别占1 .2%和4.5%。 2、LHON的发生与复合体I功能障碍有关。 线粒体氧化磷酸化是机体的重要能量来源。正常生理状态下，人体80%以_L的能量由线粒体氧化磷酸化供应。山于LHON突变改变了复合体I的亚单位结构，】到此，临床!几表现出与呼吸链功能失调有关的症状。我们以LHON患者血中血小板为研究对象，对其线粒体复合体I的活性分析表明LHON患者的血小板线粒体的氧化磷酸化功能显著下降。 3、本研究对不同引物对应的PCR产物先后采用限制性内切酶法、sSCP和DNA序列分析法进行mtDNA突变的检测，三种研究方法的结果?