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熊蜂作为一种重要的授粉昆虫在维持农业可持续发展、农作物的多样性和提高农产品质量与产量方面起着重要作用。但近年来由于病毒、寄生虫等病原物引发的疾病可能会影响熊蜂的生态、分布及其商业授粉应用,对农业生态系统已造成显著的负面影响。近期国内外学者相继发现黑蜂王病毒(BQCV)与残翅病毒(DWV)等蜜蜂病毒和东方蜜蜂微孢子虫(Nosema ceranae)可跨种侵染熊蜂,而我国关于蜜蜂病原物侵染熊蜂的病理研究报道仍为空白。故本文采用RT-PCR、qRT-PCR技术、荧光显微镜技术、电镜技术等围绕BQCV、DWV对熊蜂的侵染、N.ceranae的检测鉴定及对小峰熊蜂的侵染开展研究。结果主要为以下三个部分:1)对熊蜂体内的7种蜜蜂常见病毒(ABPV、BQCV、CBPV、DWV、KBV、IAPV、SBV)进行了检测,其中:小峰熊蜂与红光熊蜂BQCV感染率分别为19.50%和20%,而DWV感染率分别为5.5%和4%。对BQCV与DWV的RNA正负链检测得出BQCV在小峰熊蜂幼虫中的负链阳性率较高(36%),DWV则在小峰熊蜂工蜂中的负链阳性率较高(12%)。qRT-PCR定量分析发现,与小峰熊蜂相比,红光熊蜂幼虫感染BQCV量最高,红光熊蜂工蜂的感染量最低,但红光熊蜂工蜂DWV感染量最高,红光熊蜂雄性蜂DWV感染量最低。2)在扫描电镜下观察N.ceranae发现其呈现椭圆形且表面有粗糙褶皱。在透射电镜下观察N.ceranae的内部结构验证了孢子壁较厚且由内至外有三层结构,极丝管环绕于核周围且具有四层结构。通过荧光染色试剂Calcofluor WhiteM2R与核酸染料Sytox Green双重染法来鉴别N.ceranae孢子的存活状态,死孢子呈现黄绿色荧光,活的呈现蓝白色荧光,而寄主细胞、细菌、病毒等不被染色。3)熊蜂感染N. ceranae后,初期工蜂除取食减少和行动迟缓外无明显外观染病特征,后期工蜂萎靡,衰弱,飞翔无力。解剖后镜检发现中肠仅存少量孢子,但充满大量的细菌;熊蜂肠道组织切片发现其侵染中肠上皮细胞后导致核膨大并变形、线粒体体积变小甚至解体,内质网紊乱,但孢子只侵染寄主细胞质而不侵入细胞核,最终导致线粒体解体,细胞破裂;qPCR定量分析得出在接种的3-4d中肠和脂肪体中N. ceranae的感染量达到最高值,其他组织则基本未检测到。结论:首次在国内饲养熊蜂上发现BQCV和DWV两种蜜蜂病毒;通过双重荧光染色鉴别N.ceranae孢子的活性,并初步确定N. ceranae可跨种侵染熊蜂。