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[研究背景]肝纤维化是机体对急性或者慢性肝脏损伤而产生的损伤-修复过程,以大量的细胞外基质沉积于肝脏为主要表现。肝星状细胞的活化与增殖被认为是这一病变的关键环节。活化的肝星状细胞的增殖和分泌细胞外基质能力大大增加,且收缩和迁移能力增强。因此大部分的抗肝纤维化的研究是针对肝星状细胞而展开。Notch信号通路在细胞增殖、分化和正常胚胎发育中的作用是必不可少的。Notch在哺乳动物中的配体受体分子逐渐被发现。Notch信号通路通过受体与邻近细胞配体结合以后,受体胞内侧被γ-分泌酶水解为胞内段(NICD)后转入核内最终同核内目的基因结合而启动信号转录。越来越多的研究表明Notch信号通路参与纤维化疾病,然而其在肝纤维化的具体作用机制尚未被完全地阐明。上皮间质转化(EMT)是一种上皮细胞逐渐失去上皮的表型特征而分化为具有间质细胞特性的现象。大量的研究已经表明EMT在器官纤维化发生中起到重要的作用。TGF-β1被认为是导致EMT最强的细胞因子。Notch信号被证明与EMT有关。目前认为肝脏分泌细胞外基质的肌成纤维细胞可以由多种细胞经EMT发展而来。因此本实验假设Notch信号通路参与肝纤维化的发生而展开研究。[目的]通过干扰Notch信号通路影响HSC的活化；构建rAAV2/1-Jagged1-shRNA治疗实验性大鼠肝纤维化；应用γ-分泌酶抑制剂阻断Notch信号通路进一步探讨Notch信号通路与肝纤维化的关系。[方法]设计Tagman探针检测Notch信号在HSC-T6中的具体表达情况,同时应用TGF-β1刺激HSC-T6,观察Notch信号的变化情况。分别转染Jagged1siRNA入HSC-T6沉默Jagged1基因和转染携带全长Jagged1基因的真核表达质粒pcDN A3.1-Jaggedl入HSC-T6过表达Jaggedl, PCR和Western-blot检测Jagged1, a-SMA and collagen I;另外应用TGF-β1预刺激HSC-T6,然后再沉默Jagged1,同样的方法检测相同指标。构建rAAV2/1-Jaggedl-shRNA静脉注射入大鼠,激光共聚焦显微镜下观察转染效率；免疫荧光观察Notch信号的变化,PCR和Western-blot检测EMT相关蛋白的变化效果。DAPT腹腔注射大鼠肝纤维化模型,同样的方法检测Notch信号通路的变化,大鼠肝纤维化变化情况和EMT相关蛋白变化情况。[结果]Notch信号在HSC-T6中是激活的。TGF-β1能显著增强HSC-T6细胞Notch信号的表达。基因沉默Jagged1抑制HSC-T6的活化,而过表达Jagged1则促进HSC-T6的活化。rAAV2/1-Jaggedl-shRNA静脉注射入动物体内,干预组较对照组肝纤维化程度明显减轻,a-SMA表达明显低于对照组,而且TGF-β1, snail等蛋白相应表达下降,差异有统计学意义(P<0.05)。DAPT腹腔注射大鼠肝纤维化模型后则得到了同样的效果。[结论]肝纤维化的形成与Notch信号通路的激活密切相关；干扰Notch通路可能成为一种新的抗肝纤维策略。