变应性鼻炎患者血清外泌体NR_152735.1、ENST00000486571、ENST0000442171的表达变化及意义

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背景:变态反应性鼻炎(Allergic rhinitis,AR)又称作为变应性鼻炎或者过敏性鼻炎,是一种由Ig E介导的变态反应性疾病。长链非编码RNA(Long non-coding,Lnc RNA)为非编码家族中的一员,近年来发现其可以通过调节基因表达来参与慢性炎症的发病过程。外泌体是细胞通过胞膜分泌到胞外的微小囊泡体,其内携带复杂的生物活性物质,并运载到达指定位置,对受体细胞基因表达、生物活动等进行干预,从而参与细胞的生命活动调节。在前期实验中,我们课题组通过对AR组和对照组的血清外泌体Lnc RNA进行差异表达分析,建立了AR患者血清外泌体来源的Lnc RNA特异性的差异表达谱。目的:通过比较变应性鼻炎患者和对照组人群血清外泌体NR152735.1、ENST00000486571、ENST0000442171的差异,验证了前期表达谱的实验结果,并分析了其与疾病严重程度的相关性,从而为变应性鼻炎患者的病因预测、疾病诊断、治疗及预后评估提供了新的研究靶点。方法:从2020年1月~2021年10月期间来泰州市人民医院耳鼻咽喉科就诊的患者中,按照排纳标准挑选24名AR组及24名对照组患者,抽取外周血8m L,收集临床检验资料包括血清特异性Ig E、变应原点刺原实验等,询问患者临床症状,用VAS评分(视觉模拟量表评分)对患者AR严重程度进行评估。利用exo Easy Maxi Kit试剂盒提取AR组与对照组的血清外泌体,利用Western Blot鉴定分离所得外泌体。使用qRT-PCR来检测这三种LncRNAs的表达。结果:1.提取血清中的外泌体,用Western Blot检测外泌体标志蛋白的表达,结果显示,提取的外泌体表达外泌体特异性标志蛋白CD63及TSG101。2.AR组血清外泌体ENST00000486571、NR152735.1、ENST0000442171表达量相对于对照组分别为17.39780426、33.8050451、5.142607333。此表明与对照组相较,AR组血清外泌体中Lnc RNA ENST0000048657、NR152735.1、ENST0000442171表达均显著升高,差异有统计学意义(t=4.006,P=0.0002;t=2.496,P=0.0166;t=3.340,P=0.0017)。q RT-PCR检测结果与基因测序结果趋势基本一致,均为AR组较对照组基因表达显著增高。3.AR中度组与重度组患者血清外泌体ENST00000486571、NR152735.1、ENST0000442171的差异分析结果显示,与AR中度组比较,AR重度组患者血清外泌体ENST00000486571、NR152735.1、ENST0000442171基因表达水平均显著升高,差异有统计学意义(t=8.370,P<0.0001;t=6.405,P<0.0001;t=4.408,P=0.0002)。4.对AR组患者ENST00000486571、NR152735.1、ENST0000442171的基因表达与VAS评分的相关性分析显示,ENST00000486571、NR152735.1、ENST0000442171的基因表达量与VAS评分均呈显著正相关性(r=0.9165,P<0.0001;r=0.9170,P<0.0001;r=0.9137,P<0.0001;)。结论:AR患者血清来源的外泌体Lnc RNA ENST00000486571、NR152735.1、ENST0000442171表达均显著升高,且与疾病的严重程度相关,有望为变应性鼻炎的发病机制、诊断、疗效评估提供新的靶点。
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