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本文中对白腐真菌粗毛栓菌YDHSD(Trametes trogii)分泌的漆酶进行了纯化,并对显色圈现象中纤维二糖脱氢酶(CDH)和漆酶的协同作用机制进行了初步探讨。
对白腐真菌粗毛栓菌YDHSD(Trametes trogii)产漆酶的发酵条件进行了初步研究,结果表明菌体生长6天漆酶酶活最高,麸皮培养基成本低产酶高。对白腐真菌粗毛栓菌YDHSD(Trametes trogii)产生的漆酶进行了纯化。纯化过程中经过冷冻/解冻、超滤、硫酸铵沉淀、DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析、凝胶过滤层析等方法,得到了初步纯化的漆酶,其分子量约为90kDa。
考察了不同的白腐真菌产CDH的情况。白腐真菌粗毛栓菌YDHSD(Trametes trogii)、杂色云芝Sdu-4(Trametes versicolor)、裂褶菌(Schizophyllum commune)、白囊耙齿菌dft-1(Irpex lacteus)和毛栓菌Lg-9(Trametes hirsuta)产纤维二糖脱氢酶(CDH)的酶活都很低,几乎为零。培养基成分、不同碳源和氮源、CDH酶活测定方法、以及叠氮化钠对白腐真菌产纤维二糖脱氢酶(CDH)没有影响。
对显色圈现象进行了初步研究。对不同的有机溶剂对愈创木酚及其降解产物的提取能力进行了比较,结果表明的乙腈和乙酸乙酯的抽提能力较高。对愈创木酚及其降解产物的提取方法的改进进行了尝试。此外,还检测了显色圈各区域的漆酶和纤维二糖脱氢酶的酶活,通过紫外可见光谱对变色圈不同区域的物质进行了分析。并用从白腐真菌粗毛栓菌YDHSD(Trametes trogii)中分离纯化的漆酶和二硫苏糖醇(DTT)对变色圈现象就行了验证。认为平板显色圈中的红色区域是由于愈创木酚被白腐真菌分泌的漆酶氧化所致,褪色区域是由于纤维二糖脱氢酶(CDH)把漆酶氧化得到的有色物质还原所致,褪色还是显色反映了是漆酶还是纤维二糖脱氢酶(CDH)起作用。显色圈的形成是一个氧化还原机制。漆酶和纤维二糖脱氢酶(CDH)在平板显色圈现象中起重要作用,是木质素降解过程中的重要酶类。实验表明漆酶和纤维二糖脱氢酶(CDH)的协同作用表现为纤维二糖脱氢酶(CDH)可以还原漆酶的氧化产物。