非小细胞肺癌是全世界最常见的癌症,全球每年新增病例超120万。激活转录因子-2(activating transcription factor 2,ATF-2)属于转录因子ATF家族蛋白,是转录复合体的不可缺少的组成部分。在细胞核或细胞质ATF2的亚细胞定位不同,呈现出双功能活性致癌或抑癌基因,ATF2的核定位和其致癌功能相关,细胞质定位与其发挥肿瘤抑制功能相关。本研究主要探讨非小细胞肺癌组织中ATF2表达及临床分期、无病生存率的关联情况,同时研究了ATF2在人类非小细胞肺癌细胞系的表达与细胞增殖的相关性,并初步确定ATF2可以成为非小细胞肺癌预后的潜在预测标志物。目的:探讨ATF-2蛋白表达水平对非小细胞肺癌细胞增殖和预后的影响。方法:1、采集86例非小细胞肺癌患者的病理切片,免疫组化检测肺癌组织及癌旁组织ATF-2和pATF-2蛋白的表达情况,并统计分析ATF-2与患者临床病理学参数的相关性。2、采集10例非小细胞肺癌术后新鲜肺癌组织和癌旁组织标本,通过qRT-PCR、Western Blot等方法检测其ATF-2 mRNA和ATF-2蛋白的表达水平。3、shRNA转染H1975和H1299肺癌细胞系,使其干扰ATF-2基因表达,转染48h后Western Blot法检测肺癌细胞系的ATF-2蛋白表达,并检测H1975和H1299的增殖活性变化。4、通过质粒转染技术构建稳定表达ATF-2蛋白的HBE细胞株,并采用集落形成试验和WST-8试验检测其增殖活性的变化。结果:1.ATF2 mRNA在肿瘤组织比癌旁组织有明显上调,肿瘤的ATF2蛋白质含量高于癌旁组织。2.ATF2表达与非小细胞肺癌临床分期有显著相关性,ATF2表达水平越高,分期越晚。3.ATF2和pATF2在淋巴结转移的非小细胞癌中的标本和没有伴随淋巴转移的标本组织中阳性表达差别是有显著性,ATF2和pATF2的高表达是与淋巴结的转移有密切关系的。4.在非小细胞肺癌标本中存在ATF2高表达的患者,其无病生存时间显著缩短,ATF2低表达和较长的无病生存时间相关,高p-ATF2表达和生存时间缩短呈显著相关,和无病生存时间存在极显著相关。5.ATF2和pATF2表达与患者的年龄、性别、组织大小无显著相关性。6.pATF2表达主要出现在非小细胞肺癌的细胞核中。细胞质也能够观察到分散染色的p-ATF2的表达。在86例患者肿瘤组织中,有65例属于pATF2高表达(75.6%)。在细胞质和细胞核中,ATF2的表达没有显著性差异。肿瘤癌旁正常组织中,ATF2和pATF2的表达没有显著性差异(P=0.056)。ATF2对于非小细胞肺癌的预后被观测到有预测意义,ATF2阳性表达和临床病理因素如年龄,性别和转移之间的相关性没有统计学意义。NSCLC患者细胞核高表达pATF2与肿瘤晚期,肿瘤大小和转移具有显著相关性。7.ATF2在非小细胞肺癌细胞株表达阳性,在细胞系H446、H1975H1650,H1299,PC9的阳性表达明显增高。8.ATF2的siRNA被证实能够有效的对ATF2的表达进行下调,利用MTT实验分析,显示在H1299和H1975细胞中,低表达的ATF2能够导致细胞生存能力的降低,ATF2的阳性表达能够促进细胞增殖,而下调ATF2则能够抑制细胞增殖。9.在HBE细胞株中,ATF2表达水平升高可以促进HBE细胞的增殖生长。结论:ATF2在非小细胞肺癌组织中存在过表达,并与患者的预后存在一定的相关性,有可能成为潜在的预后指标。体外实验中,ATF2表达上调可以促进肺癌细胞系的增殖,而下调ATF2表达后肺癌细胞系的增殖能力明显减弱。该研究初步提示ATF2有望成为非小细胞肺癌新的预后因素,尚需进一步的深入研究。