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[研究背景]近几年来,我国某些省份相继出现并报告了一些以发热、血小板减少、腹泻等临床表现的感染性病例,部分病情严重患者可因多器官功能衰竭而导致死亡。2010年5月经中国疾病预防控制中心的专家实验,该类疾病患者的血清中存在一种布尼亚病毒科的新病毒,该病毒被命名为发热伴血小板减少综合征病毒(severe fever with thrombocytopenia syndrome virus,SFTSV),并将该病毒所致疾病命名为发热伴血小板减少综合征(severe fever with thrombocytopenia syndrome,SFTS)。目前最常用的SFTS病例的早期诊断两种方法是实时荧光PCR和酶联免疫吸附实验(ELISA),由于两种方法的实验原理、检测目的、临床意义等方面不尽相同,因此探讨两种方法的差异、研究采样时间与实验结果的关系对实际工作有重要的指导意义。另外通过分析SFTS在山东省的流行病学特点,可对本地区发热伴血小板减少综合征的临床诊断及防控策略和措施的制定提供可靠的科学依据。[研究目的]1、研究发热伴血小板减少综合征发病后样本采集时间与病毒检出率之间的关系,为确定最佳采样时间提供依据。2、比较实时荧光PCR法与酶联免疫吸附实验(ELISA)在发热伴血小板减少综合征病例检测中的差异,探讨两种方法在发热伴血小板减少综合征检测中的应用价值。3、分析山东省发热伴血小板减少综合征的流行病学特征,为山东省发热伴血小板减少综合征的预防和控制提供科学依据。[研究方法]1、采集2013年1月~2015年12月山东省各医院疑似SFTS病例血清样本,记录发病时间和采样时间。用实时荧光定量PCR方法检测血清中发热伴血小板减少综合征病毒RNA,分析病毒核酸检出率与病人血清采集时间之间的关系。2、随机选取95份SFTS急性期病例血清样本,实时荧光定量PCR方法检测血清中发热伴血小板减少综合征病毒RNA,用酶联免疫吸附法分别检测血清中的IgM、IgG和总抗体,采用Kappa值的计算、卡方检验,比较几种检测方法的效果。3、收集山东省发热伴血小板减少综合征病例的流行病学资料,采用描述性流行病学方法分析其三间分布特征。[结果]1、共采集2013年1月~2015年12月山东省疑似SFTS病例血清样本959例,全部进行Real-time PCR检测,其中阳性标本519份,阳性率54.11%。通过对患者发病天数与SFTSV核酸检测阳性关系的统计与分析,发热伴血小板减少综合征患者在发病第0~19天,血清中均可检出SFTSV阳性核酸,在发病3~8天采血检出的阳性率较高,第7天最高,达64.52%。发病8天之后采血检测阳性率逐渐下降,发病14天后采血检出阳性率很小。2、经实验室检测95份标本,IgM阳性39例,IgG阳性4例,总抗体阳性29例。PCR结果与IgM结果之间的Kappa值为0.286,证明两种检验方法的一致性程度尚好;PCR结果与IgG结果之间的Kappa值小于零,证明两种检验方法结果不一致;PCR结果与总抗体结果之间的Kappa值小于零,证明两种检验方法结果不一致;总抗体结果与IgM结果之间的Kappa值为0.5021,证明两种检验方法中度一致;总抗体结果与IgG结果之间的Kappa值为0.1164,证明两种检验方法的一致性程度较轻。3、山东省2013—2015年SFTS的发病率,各年、月和地市之间不同,差异有统计学意义;报告病例呈现明显的季节性,5~8月报告病例占75.6%,病例以40~79岁年龄组居多,农民为主。40~79岁年龄组,尤其是60岁以上年龄组的人群病死率较高。[结论]1、实时荧光定量PCR方法检测SFTSV核酸,在患者发病第3~8天的血液中检测到病毒核酸的阳性率较高,提示该时间段内采血能提高实时荧光定量PCR检测阳性率。2、SFTS的早期诊断应首选实时荧光PCR法,ELISA—IgM法可作为辅助手段,随着病程的延长ELISA—IgM法是更适宜的诊断方法。3、山东省SFTS病例主要发生在丘陵山区的中老年人,性别差异无统计学意义。病例呈现明显的季节分布特征,不同地区发病存在差异。针对重点地区的重点人群在疾病流行前期开展健康教育和宣传,是预防疾病发生的重要防控措施。