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高压能够影响水稻等种子的萌发,但对其影响的机理罕见有报道。本研究利用各种不同的压力条件处理水稻种子,系统地观测了种子萌发受到的影响,同时研究了高压处理后水稻种子细胞膜透性、淀粉酶活性、过氧化物酶(GPX)活性、过氧化氢酶(CAT)活性和脂氧合酶(LOX)活性等生理特性受到的影响,并利用mRNA差异显示技术(DDRT-PCR)研究了高压处理后水稻种子萌发过程中基因表达的差异,试图从生理生化和分子水平探明高压影响水稻种子萌发的机理。主要研究结果如下:
1.高压处理对水稻种子发芽势和发芽率的影响
利用一系列强度(25 MPa~125 MPa)的高压处理不同浸种时间(0 h~72 h)的籼稻和粳稻种子,观测到高压处理后,所有品种种子的发芽势和发芽率均随处理压力的升高而降低;相同的压力处理后,发芽势和发芽率在同一品种不同浸种时间的种子之间也存在显著差异;相同高压条件下粳稻品种秋光的发芽势和发芽率都比籼稻品种粤丰占的高。用高压处理高压后代压诱1号和压诱2号种子,结果发现压诱1号和压诱2号种子对高压的耐受性与非高压后代粤丰占种子的没有显著差异。以上结果表明高压能够影响种子的萌发,并且不同类型的水稻品种种子的耐压性不同,高压处理不能明显提高其后代的耐压性。
2.高压处理对水稻种子萌发过程中生理特性的影响
高压处理后,水稻种子细胞膜透性随处理压力的增大而增加,且不同浸种时间之间也存在显著性差异;种子在萌发过程中α-淀粉酶和β-淀粉酶活性随处理压力的增加而显著降低;高压处理后种子的发芽势和发芽率与细胞膜透性增加的百分率呈显著负相关,而与α-淀粉酶和β-淀粉酶活性均存在极显著的正相关,这表明高压处理使种子的发芽势和发芽率降低与细胞膜透性的增加及淀粉酶活性降低有关。高压处理后,水稻种子萌发过程中GPX活性和CAT活性都降低,而LOX活性提高,这表明高压处理产生了氧胁迫,从而导致膜脂过氧化等损伤,这可能是高压影响水稻种子萌发的又一个重要原因。
3.高压处理对水稻种子萌发过程中基因表达的影响
利用mRNA差异显示技术研究了高压处理对水稻种子萌发过程中基因表达的影响,结果表明,高压处理后的水稻种子与对照种子在基因表达上存在着一定差异,实验过程中得到了44条差异片段,对这些差异片段进行反向Northern点杂交,得到了1个表达受到抑制和5个表达受到诱导的阳性片段,经克隆测序后得到了这6个差异表达片段的序列。用BLAST软件进行相似性分析,结果显示其中3个片段的序列在GenBank中找不到与其相似性高的cDNA序列,为未知功能的序列;另外2个片段编码的蛋白产物分别与水稻转座蛋白(ACCESSION NO. ABA99341.1)和逆转座蛋白(ACCESSION NO。AAP52642.1)有78%和100%的相似性;1个片段与水稻11号染色体上的一个cDNA序列(ACCESSION NO. AK066020.1)有97%的相似性,而这个cDNA序列与编码大麦的NBS-LRR抗病蛋白家族的mRNA(ACCESSION NO.AJ507095.1)具有很高的相似性(EXPECT:1e-134)。