雄烯二酮作为不可或缺的中间体在药物制造尤其是甾类药物中被广泛应用,但雄烯二酮的化学制造工艺一般都较为复杂和困难,并且在生产过程中会造成严重的环境污染。生物方法生产雄烯二酮较化学方法更经济也更环保,因此具有非常可期的发展前景。作为我国食品产业的重要组成部分之一,大豆加工产品在生产过程中,会产生大量的豆粕与馏出物,而大豆加工馏出物中的主要组分是植物甾醇,植物甾醇可作为生物技术生产雄烯二酮的底物进行深度利用。为了更好地规模化生产雄烯二酮,解决供需失衡,通过使用双水相系统来提高底物浓度,利用分枝杆菌转化豆油副产物植物甾醇的方法生产雄烯二酮。通过对比多种检测方法,发现以薄层层析法作为定性检测,以高效液相色谱作为雄烯二酮的定量检测,是比较高效且精确的。通过正交试验确定了微生物生产雄烯二酮的最优条件为:双水相系统为水/葵花油,温度30℃、起始pH 6.5、底物浓度0.4 g/L。在这种条件下,雄烯二酮的产率可超过84%。在正交试验的基础上,探究了影响雄烯二酮产率的其他因素,通过响应曲面实验的设计和分析,得出的最佳工艺条件是转速250 rpm、接种量14.83%、有机相比例20.65%、装液量30%。在此最优条件下,雄烯二酮的产率可超过85%。对比多种有机溶剂对发酵系统中雄烯二酮的萃取效果,选择乙酸乙酯作为萃取剂,相比为1,萃取级数为4。萃取完成后,可减压蒸馏来回收74.58%的乙酸乙酯。异丙酮萃取剩余溶液中的油,可以实现油的回收利用,回收率可达82.45%。本研究初步为微生物法生产雄烯二酮寻找到了适宜的工艺条件,并为其规模化生产提供了数据和理论方面的支持。实现了资源的回收利用,节约了生产成本。