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乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤,在世界范围内发病率居第一位。虽然现阶段综合治疗方案提高了很多患者的生存获益,但是,三阴性乳腺癌侵袭性强,缺乏治疗靶点,治疗手段单一,只能进行化疗,并且因为三阴型乳腺癌具有异质性,一些亚型的患者易产生耐药,另外一些亚型则对化疗不敏感,所以早期发生转移的几率高。目前普遍认为,转移的发生是因为原发部位的肿瘤细胞发生上皮间质型转化(Epithelial–Mesenchymal Transition,EMT),即细胞失去上皮细胞特性,获得间质细胞特性,易于侵入血液,从而形成远处转移灶。细胞发生EMT,常伴随着EMT标志物的变化。E-cadherin的表达下调,N-cadherin和Vimentin上调,从而导致肿瘤细胞的的侵袭能力增加。这些分子水平的变化受EMT相关基因,如Snail,Twist,Zeb1 and MMP的调控。EMT相关基因是几条信号传导通路的靶基因,其中最重要的是TGF-β1/Smad和NF-κB信号通路。NF-κB信号通路参与肿瘤的增殖、凋亡、迁移和侵袭,还可以调节炎症反应。通路上关键因子为磷酸化的RelA(p65),而其抑制因子为IκB,两者互相制约,调控EMT的靶基因。因此,控制NF-κB信号通路介导的EMT,抑制三阴性乳腺癌的迁移和侵袭十分必要。鹿角是我国的传统中药,曾用于治疗各种炎症反应。鹿角提取物的药用功能广泛,包括抗氧化、抗炎、防治骨质疏松、调节免疫和抗肿瘤等。既往有研究证明,鹿角提取物可以治疗乳腺炎和乳腺增生。但是迄今为止,关于鹿角能否抑制乳腺癌的的转移能力的研究极为罕见,本研究通过观察鹿角对三阴乳腺癌细胞EMT的作用,探索鹿角对调控EMT相关基因及信号通路的机制,初步证明其抑制肿瘤转移的潜力。方法:(1)用MTT法检测不同浓度鹿角提取物处理后的MDA-MB-231细胞的细胞增殖比例;用流式细胞技术检测细胞凋亡情况;(2)用划痕实验检测各组细胞的迁移能力,同时筛选出鹿角提取物的最佳浓度;用筛选出的鹿角提取物最佳浓度处理MDA-MB-231细胞,完成后续实验;用transwell小室侵袭实验检测鹿角提取物对各组细胞侵袭能力的影响;(3)为证明鹿角提取物是通过抑制细胞的EMT,从而影响细胞的侵袭能力,在培养体系中加入EMT促进因子TGF-β1后,观察鹿角提取物对MDA-MB-231细胞的侵袭、迁移的影响;(4)用RT-PCR和Western blot分别从mRNA和蛋白水平检测鹿角对细胞EMT标志物的变化,以及用TGF-β1(20ng/ml)干涉后EMT水平的变化。(5)用RT-PCR和western blot检测鹿角对MDA-MB-231细胞NF-κB信号通路关键因子和抑制分子,及其靶基因的mRNA转录水平和表达水平。结果:(1)鹿角提取物对MDA-MB-231细胞的增殖和凋亡无影响;(2)鹿角提取物可以抑制MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭能力;并且鹿角提取物的最佳浓度为0.5mg/ml;(3)鹿角提取物使MDA-MB-231细胞E-Cadherin的转录和表达水平明显上调,Vimentin、MMP-9和EMT-TFs的转录和表达水平明显下调;(4)TGF-β1处理后MDA-MB-231细胞的侵袭、迁移能力增加,鹿角提取物可以抑制TGF-β1处理后MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭,而且抑制效果更为明显;(5)TGF-β1可以通过降低IκB的表达水平激活NF-κB通路;鹿角提取物可以增加IκB的表达水平,降低NF-κB的转录和表达水平,降低靶基因Twist,SLUG,MMP-9的表达。结论:鹿角提取物通过调控NF-κB通路介导的EMT过程,抑制MDA-MB-231细胞的侵袭和迁移。