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目的:通过一系列体外实验鉴定一种选择性结合MUC4的多肽ZP-16,并用于体内检测MUC4过度表达的胰腺癌。方法:1、多肽荧光探针ZP-16-Cy5的合成与表征:委托上海生工公司完成。2、ZP-16-Cy5的免疫荧光细胞化学实验:各肿瘤细胞株经Western Blot检测其MUC4表达水平后分别与抗MUC4荧光抗体（1G8-FITC）和ZP-16-Cy5进行免疫荧光化学实验,激光共聚焦显微镜观察各细胞株荧光强度,并用流式细胞仪测定BxPC-3和U87细胞分别与1G8-FITC和ZP-16-Cy5结合产生的荧光强度。3、ZP-16-Cy5与BxPC-3细胞结合的表征:选取高表达MUC4的BxPC-3用于ZP-16-Cy5与ZP-16的竞争抑制实验和ZP-16-Cy5与1G8-FITC的共定位实验;并同时用激光共聚焦显微镜和流式细胞仪监测ZP-16-Cy5与BxPC-3结合的量效关系和时效关系。4、ZP-16-Cy5的免疫荧光组织化学实验:取正常胰腺组织、胰腺癌组织和低级别纤维黏液样肉瘤组织,行HE染色和免疫组化（IHC）实验后,再进行ZP-16-Cy5和1G8-FITC的免疫荧光化学实验和共定位实验。5、ZP-16-Cy5体内检测高表达MUC4的肿瘤:制备BxPC-3和U87荷瘤裸鼠模型,待瘤体长到1cm左右尾静脉注射ZP-16-Cy5（4.0nmol/20gWT）,小动物活体成像仪观测种植瘤成像情况。结果:1、ZP-16-Cy5的表征:分子量为2558.1,纯度为99.89%。2、ZP-16-Cy5与不同肿瘤细胞的结合:Western Blot显示MUC4表达由高到低的细胞依次为:BxPC-3、CFPAC-1、Capan-1、PANC-1、HPAF-Ⅱ、PC-12、U87;ZP-16-Cy5和1G8-FITC与各细胞株结合的情况相似,也与Western Blot结果一致。流式细胞术证实BxPC-3与1G8-FITC结合的平均荧光强度值比U87高418%（P<0.01）;BxPC-3与ZP16-Cy5结合的平均荧光强度值比U87高189%（P<0.01）。3、ZP-16-Cy5与BxPC-3细胞结合的表征:ZP-16可竞争性抑制ZP-16-Cy5与BxPC-3的结合,ZP-16-Cy5与1G8-FITC在BxPC-3上结合的重叠性好,表明ZP-16-Cy5与细胞结合位点有特异性,且与1G8-FITC的结合表位不同。ZP-16-Cy5与BxPC-3结合符合一级反应动力学特征,结合速度快[K=0.105min-1(T1/2=6.9min)],亲和力高（Kd=17.3nmol/L）。4、ZP-16-Cy5与人胰腺癌组织的结合:IHC显示胰腺癌和低级别纤维粘液样肉瘤均有MUC4表达,正常胰腺组织未见MUC4表达;ZP-16-Cy5与1G8-FITC的免疫荧光组织化学实验结果与IHC结果相似:胰腺癌荧光强,低级别纤维黏液样肉瘤荧光较强,正常胰腺组织未见荧光;共定位结果显示ZP-16-Cy5与1G8-FITC的荧光分布及强度相似,且两者Merge之后重合度较高。5、ZP-16-Cy5体内检测高表达MUC4的肿瘤:BxPC-3荷瘤鼠尾静脉注射ZP-16-Cy5（4nmol/20gWT）后9min瘤体出现荧光,随后逐渐增强,55min达高峰后逐渐减弱,180min消失,有明显的荧光信号聚集过程。种植瘤组织冰冻切片符合胰腺癌病理特征,并在LSCM下可见有荧光信号。U87荷瘤鼠尾静脉注射ZP-16-Cy5（4nmol/20gWT）后5min～120min瘤体有一定的荧光信号,但无明显的荧光信号聚集过程。结论:1.ZP-16可以结合表达MUC4的肿瘤细胞,其特异性与抗MUC4荧光抗体（1G8-FITC）相似。2.ZP-16与细胞结合位点有特异性,且与1G8-FITC的结合表位不同。3.ZP-16与BxPC-3结合符合一级反应动力学特征,结合速度快[K=0.105min-1(T1/2=6.9min)],亲和力高（Kd=17.3nmol/L）。4.ZP-16可以结合表达MUC4的临床肿瘤组织,且与1G8-FITC重叠性较好。5.ZP-16可体内检测高表达MUC4的胰腺肿瘤,有望作为特异性配体用于肿瘤的诊断和治疗。