目的:研究临床验方化毒补虚方含药血清体外对人肺腺癌A549细胞增殖抑制及诱导凋亡的作用，并通过RT-PCR法检测其对Smac、CDK4基因表达的影响，探讨化毒补虚方治疗肺癌的作用机制。　　方法:(1)以化毒补虚方水煎液为SD大鼠灌胃，设为实验组;空白组予以生理盐水灌胃;待大鼠血清含药浓度达到理论稳态时（灌胃5天以上）采血，分离大鼠血清，分别制备为含药血清和空白血清;(2)MTT法:在96孔板内接种肺癌A549细胞悬液，每孔细胞总数约为5×103个，100ul/孔，设空白血清组、12.5％含药血清组、25％含药血清组、50％含药血清组、顺铂药物组，分别观察24h、48h细胞增殖情况，采用MTT比色分析法检测不同浓度、不同时间化毒补虚方大鼠含药血清对肺癌A549细胞增殖的影响;(3)Annexinv/PI双染色流式法:在75cm2培养瓶中接种肺癌A549细胞悬液，每瓶细胞总数约为1×104个，5ml/瓶，设空白血清组、12.5％含药血清组、25％含药血清组、50％含药血清组、顺铂药物组，分别观察24h、48h细胞凋亡情况，采用Annexinv/PI双染色流式法检测化毒补虚方大鼠含药血清对肺癌A549细胞凋亡的影响;(4)RT-PCR法:在75cm2培养瓶中接种肺癌A549细胞悬液，每瓶细胞总数约为1×104/ml，5ml/瓶，设空白血清组、12.5％含药血清组、25％含药血清组、50％含药血清组，用逆转录-多聚酶链式反应法(RT-PCR)检测48小时化毒补虚方大鼠含药血清对肺癌A549细胞Smac、CDK4基因表达的影响。　　结果:(1)细胞形态学变化:加入化毒补虚方含药血清后，镜下可见细胞增殖缓慢，密度明显减低;贴壁细胞形态呈长梭形，部分细胞逐渐皱缩，胞体折光性减弱;随着含药血清浓度增大，处理时间延长，部分细胞逐渐变圆脱落。结果表明，与同时间点空白血清组相比，化毒补虚方含药血清对人肺腺癌A549细胞具有一定的增殖抑制及诱导凋亡作用，可使A549细胞增殖速度减慢，抑制正常细胞生长，并诱导凋亡，且随着作用时间的延长和含药血清浓度的增加，其增殖抑制与诱导凋亡作用明显增加。　　(2)MTT结果:25％、50％的化毒补虚方含药血清组与同时间点空白血清组相比，均对细胞有明显的增殖抑制作用，其24h抑制率(％)分别为(5.850±2.326)、(16.133±10.366)(P＜0.05)，48h抑制率(％)分别为(6.700±3.483)、(21.650±9.515)P＜0.05)，50％含药血清较25％含药血清抑制作用更为显著(P＜0.05)，且随处理时间延长而其抑制作用也随之增加。　　(3)Annexinv/PI双染色流式结果:12.5％含药血清、25％含药血清、50％含药血清组24h诱导凋亡率(％)分别为(2.53±0.75)、(4.90±1.51)、(11.78±1.05)（P＜0.01)，48h诱导凋亡率(％)分别为(3.35±0.50)、(8.60±0.85)、(15.90±0.99)（P＜0.01)，表明化毒补虚方各浓度含药血清组与同时间点空白血清组相比，差异有显著地统计学意义（P＜0.01)，说明化毒补虚方对A549细胞具有明显的诱导凋亡作用。其诱导凋亡作用在一定时间内与剂量-时间呈正相关关系，即随着作用时间的延长和含药血清浓度的增加，其诱导凋亡作用明显增强。化毒补虚方50％含药血清组作用48h，达到其最大诱导凋亡率，为15.90％左右。　　(4)RT-PCR结果:从实验结果扩增产物凝胶电泳图可看出，化毒补虚方含药血清作用于人肺癌A549细胞48小时后，与对空白血清组比较，Smac mRNA表达显著增加，CDK4 mRNA表达显著下降，且随含药血清浓度升高其趋势更为显著。Smac mRNA蛋白相对含量为:空白血清组(0.73±0.055)，化毒补虚方12.5％含药血清组(0.79±0.140)，25％含药血清组(1.02±0.029)，50％含药血清组(1.14±0.053)。25％、50％含药血清组与空白组相比均有显著差异（P＜0.01)。CDK4 mRNA蛋白相对含量为:空白血清组(1.61±0.029)，化毒补虚方12.5％含药血清组(1.12±0.058)，25％含药血清组(0.71±0.013)，50％含药血清组(0.37±0.035)。含药血清组与空白组相比均有显著差异（P＜0.01）。由图像与数据可得出共同结果，化毒补虚方含药血清能有效上调A549细胞Smac基因的表达，下调CDK4基因的表达。　　结论:化毒补虚方对体外人肺癌A549细胞有明显的抑制增殖和诱导凋亡的作用，其作用随着药物浓度升高、处理时间延长而作用更为显著，且可上调A549细胞Smac基因的表达水平，下调CDK4基因的表达水平，这可能是其治疗肺癌，发挥抑制肺癌细胞增殖，诱导细胞凋亡的分子机制之一。