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肌肉生长抑制素(Myostatin,MSTN)是一种抑制骨骼肌生长和发育的负向调控因子,其在肌细胞的生成过程中有着重要的功能。MSTN基因的突变或者人为的添加MSTN的抗体都能够提高动物的体增重,促进肌肉的发育(Mcpherron et al. 1997);口服表达抗原的酵母可以刺激机体产生特异性的抗体(Stubbs A C 2001)。本研究通过在酵母中表达MSTN基因,口服免疫小鼠,促进了小鼠的生长;并构建了MSTN整合的酵母菌株。A.应用外显子拼接技术从猪基因组DNA中扩增出全长猪MSTN基因并构建了原核表达载体pET32a-MSTN。在大肠杆菌BL(DE3)中优化MSTN诱导表达条件并诱导表达带His标签的MSTN融合蛋白,通过镍层析柱纯化MSTN融合蛋白。B.应用外显子拼接技术从鸡基因组DNA中扩增出全长鸡卵清蛋白(ovalbumin, OVA)基因并构建包含多克隆位点的酵母表达载体JMB88-OVA。从载体pET32a-MSTN酶切出MSTN基因插入用相同的内切酶消化过的JMB88和JMB88-OVA,构建酵母表达载体JMB88-MSTN和JMB88-OVA-MSTN。将构建好的两个酵母表达载体导入酵母JMY1中,硫酸铜诱导表达MSTN和OVA-MSTN。应用原核表达的MSTN蛋白和表达MSTN的酵母作为抗原,通过注射原核表达的MSTN蛋白和表达MSTN的酵母以及口服表达MSTN的酵母免疫生长期的小鼠;免疫7周后检测各组小鼠血清有无针对MSTN的抗体并分析小鼠的体增重和各主要骨骼肌重量,验证了口服免疫表达MSTN的酵母可以诱导小鼠产生针对MSTN的特异性的抗体,并促进小鼠生长和骨骼肌的发育。C.在验证了口服表达MSTN的酵母有促进小鼠生长的功能后,设计并构建了MSTN的酵母整合载体pBlue-kan-NTS5’3’-MSTN。将线性化的pBlue-kan-NTS5’3’-MSTN载体导入酵母JMY1,获得MSTN整合酵母菌株JMY11;利用Cre/Loxp系统将报告基因KanMX4删除,得到无抗性基因的MSTN基因整合的酵母菌株JMY12;通过western blot验证了JMY12菌株可以持续表达MSTN蛋白。本研究证明了口服表达MSTN的酵母可以诱导机体产生抗MSTN的抗体,并能够促进动物的生长;同时构建了安全的可直接用作饲料添加剂的表达MSTN的酵母菌。