在水产养殖业繁荣发展的今天,为防治水产病害的发生而滥用抗生素等药物会对环境及人类自身产生严重的危害,因此人们正积极寻找更为安全有效的水产养殖病害防治方法。有益菌(probiotics)被定义为“可通过改善微生物平衡或改进原有微生物区系的属性而对宿主动物施加有利影响的活的微生物细胞”。它作为生抗生素的替代品应用于水产养殖体系中,使水体环境得到修复,病原菌得到控制,养殖动物抗病力得到增强,逐渐成为水产养殖动物病害防治的一种生物控制模式。在自然环境中,有些微生物通过抑制或杀死另一种微生物的拮抗作用来获得竞争优势。有益菌的作用机理之一便是通过产生抑菌物质或营养竞争等拮抗方式来有效地抑制病原菌生长。因此,选择具有抑菌活性的细菌作为潜在的有益菌进行研究开发,具有重要的实践意义。海洋细菌中的多个属种都具有抑菌活性,从养殖水体环境以及养殖动物体表或体内分离土著菌作为潜在的有益菌已成为国内外的研究热点。越来越多的海洋有益菌被应用于水产养殖细菌病害的防治,取得了良好的成效。本实验从健康鱼类海水养殖环境分离出具有抑菌活性的海洋有益菌JG1,采用琼脂扩散法进行体外拮抗试验并测定其抑菌谱。检测结果显示,菌株JG1抑菌谱较广,对多株海水养殖病原弧菌(Vibrio)和气单胞菌(Aeromonas)有拮抗作用。选择抑菌效果明显且重复性高的鳗弧菌(V. harveyi)VIB72作为本实验拮抗试验的指示菌株。用10-1浓度JG1菌液(菌体浓度为6.7×107cfu /mL)注射斑马鱼(Brachydanio rerio),连续观察20天后,没有发生病害或死亡的现象,初步判定其可作为潜在有益菌应用于水产养殖中。根据对细菌形态、生理生化特征和16SrDNA序列分析,鉴定菌株JG1为杀鱼假交替单胞菌(Pseudoalteromonas piscicida)。有机溶剂分步萃取菌株JG1发酵液测定,活性检测结果表明,石油醚萃取层样品以及萃取后的水层样品具有抑菌活性,表明起抑菌作用的物质有多种,其中主要是一类极性较强的大分子物质,初步推测为蛋白类物质。采用玻璃纸覆盖平板法制备菌株JG1的胞外产物,优化培养条件,发现菌株JG1在28℃下培养48 h的胞外产物抑菌活性最高。胞外产物经硫酸铵沉淀,采用超滤及葡聚糖Sephadex G-100凝胶层析手段对其中的抑菌活性组分进行部分纯化。纯化后的活性物质进行温度、pH和蛋白酶K处理,结果表明其对pH的耐受范围较广,而热处理和蛋白酶消化均可使其活性丧失,这表明杀鱼假交替单胞菌JG1的胞外抑菌物质具有蛋白质性质。根据细菌素的定义:在对数生长期产生并分泌到细胞外的一类具有蛋白质特性、对相近种属具有拮抗作用的杀菌物质,可以认为该蛋白质性质的抑菌物质属于细菌素或者类细菌素。经非变性聚丙稀酰胺凝胶电泳,进行活性检测,结果显示:海洋有益菌JG1胞外产物中有抑菌活性的组分含有黄色色素。推测该抑菌物质可能是一种色素-蛋白复合物。