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背景：胃癌是临床上常见的消化系统恶性肿瘤,其死亡率在全世界排名第三。我国是胃癌好发地区,其年患病率和死亡率均为世界平均水平的2倍多。胃癌患者单纯根治术5年生存率仅为40%左右,即使采用扩大根治术亦未能显著提高患者术后生存率,手术+化疗为其最佳治疗手段。尽管化疗药物多种多样,联合化疗可增加其有效率,而且有新药的不断研发及应用临床,但是中晚期胃癌的5年生存率仍低于30%,其中很大部分是由于化疗耐药引起。因此关于胃癌耐药的机制研究,对进一步提高胃癌治疗效果具有十分重大的意义。目前认为与胃癌耐药相关的机制包括：ABC转运蛋白的跨膜转运、谷胱甘肽S转移酶、DNA拓扑异构酶的活性、癌基因p53突变及凋亡相关通路等等。而肿瘤干细胞具有活跃的DNA修复能力、高表达三磷酸腺苷结合盒(ATP binding casstte,ABC)转运体、抗辐射、抗凋亡等特性。因此肿瘤干细胞也就可能拥有耐药的特性。研究发现Lin28是肿瘤干细胞重要的表面分子标记物,其具有能参与诱导多能干细胞的形成及维持肿瘤干细胞特性等重要功能。而在Lin28与肿瘤治疗疗效的研究方面,有研究显示Lin28可诱导肺癌细胞放疗耐受。但Lin28在胃癌中与化疗疗效有无关系,目前尚不明确。我们拟通过以下研究,阐明Lin28与胃癌化疗耐药之间的关系,并通过体外研究探索其可能的分子机制,以期更加了解胃癌化疗耐药,并找到其中可能逆转耐药的潜在靶点。方法和结果：1.Lin28表达与胃癌新辅助化疗后病理反应的相关性分析2004年至2011年我科收治有化疗前胃镜标本的新辅助化疗胃癌患者共47例。将其分为两组,化疗疗效病理评估有反应组(0-50%肿瘤细胞残留)和化疗疗效临床评估无反应组(>50%肿瘤细胞残留)。病理有反应率为61.7%(29例),38.3%(18例)患者化疗对化疗无反应。卡方检验分析结果显示Lin28表达水平和新辅助化疗后病理反应(0-50%肿瘤细胞残留vs.>50%肿瘤细胞残留)具有相关(P=0.002), Lin28表达高的病例的病理反应率低,肿瘤细胞残留多。结果提示,术前胃镜Lin28高表达的患者对化疗反应性较差,Lin28可以作为预测胃癌化疗反应性的指标。值得体外实验进一步研究。2.稳定表达Lin28胃癌细胞的构建以及Lin28与胃癌细胞化疗敏感性关系体外研究和机制探索在胃癌细胞(MKN28、MKN45、SGC7901、BGC823、AGS、N87)中,采用Western blot技术检测Lin28蛋白水平的表达量,结果提示Lin28在六株胃癌细胞中均没有表达。挑选Lin28蛋白表达阴性胃癌细胞MKN28、MKN45稳定转染质粒pcDNA3.1+-Lin28以及对照空质粒pcDNA3.1+,转染后两株细胞分别标记为MKN45/Lin28、MKN45/Vector和MKN28/Lin28、MKN28/Vector。用MTT法比较转染后两株胃癌细胞株对四种化疗药物OXA,PTX, ADM,5-Fu的化疗敏感性变化,并用流式细胞双染技术比较在药物作用后细胞凋亡的变化。结果显示转染lin28后胃癌细胞株MKN45及MKN28对OXA,PTX,ADM和5-Fu四种药物的化疗敏感性都降低,凋亡减少。通过siRNA干扰技术敲低Lin28稳转细胞系的Lin28表达,用MTT及流式凋亡检测的方法发现能增加Lin28阳性胃癌细胞的化疗敏感性,增加凋亡。用qPCR及Western Blot技术,检测稳定表达Lin28的胃癌细胞株在耐药基因及耐药蛋白表达上的变化。结果显示转染Lin28后可引起C-myc,MDR1/P-gp基因及蛋白的表达增加,周期蛋白CyclinD1表达减少；并且可致Caspase9及Caspase3的表达减少。检测siRNA干扰后Lin28阳性细胞株在mRNA及蛋白水平表达显示：敲低Lin28后可致C-myc, MDR1/P-gp的表达减少,CyclinD1表达增加。我们推测Lin28引起化疗敏感性变化的机制可能通过使胃癌细胞过表达C-myc, MDRl/P-gp,低表达CyclinD1有关。3.miR-107与Lin28基因之间的关系,Lin28/miR107通路在胃癌细胞化疗敏感性变化中起的作用及其机制研究。为研究Lin28能否通过miR-107对靶基因进行调控,检测Lin28稳定表达胃癌细胞株MKN45/Lin28及MKN28/Lin28中miR-107的表达,发现转染Lin28后细胞miR-107的表达明显下降；而当敲低Lin28的表达后,miR-107的表达上升。在稳定表达Lin28的细胞株内,导入pre-miR-107后发现Lin28蛋白及RNA水平表达的下降。从而证明了miR-107是受Lin28基因调控的下游靶microRNA之一,miR-107可能参与了Lin28引起胃癌细胞的化疗敏感性变化。将Lin28稳转细胞株和转染空载的细胞株分别转染pre-miR-107和anti-miR-107,并对转染后细胞进行药物敏感性实验。MTT与流式细胞技术的结果显示：转染了pre-miR-107后,可使Lin28阳性胃癌细胞对化疗药物敏感性增加,凋亡增加；而转染anti-miR-107的细胞变得对化疗药物敏感性下降。说明miR-107可能在Lin28引起的胃癌细胞化疗敏感性改变中起重要作用。而Western-blot及q-PCR的结果显示转染pre-miR-107后可导致C-myc, MDR1/P-gp的表达减少,CyclinD1表达增加。结论：我们通过免疫组化的方法发现胃镜Lin28表达与化疗反应之间存在联系,并可以预测新辅助化疗患者的化疗疗效。细胞实验提示Lin28可以引起胃癌细胞对化疗药物的敏感性降低。其机制可能是与抑制miR-107的成熟,从而上调靶基因C-myc, MDR1/P-gp的表达,并下调CyclinD1的表达相关。Lin28/miR-107通路可能是胃癌化疗耐药的机制之一。