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目的:神经母细胞瘤(NB)是好发于儿童的颅外恶性肿瘤,其发病率和死亡率约占儿童恶性肿瘤的7%和15%左右。S100A8和S100A9是钙结合蛋白S100超家族的重要成员,细胞内通常以二聚体的形式存在,其可作为炎性因子在调节炎症反应中起重要作用。近年来的研究表明,S100A8/A9在多种肿瘤组织中表达异常,其与肿瘤的发生发展关系密切,但与神经母细胞瘤的关系如何,尚无明确深入的报道。因此,本研究旨在课题组原有研究的基础上,通过分子生物学试验和体外成瘤实验,观察S100A8/A9是否可经WNT/β-catenin通路影响神经母细胞瘤的增殖和迁移,并探讨其分子机制,以期为NB的发生发展提供相关的理论研究依据。方法:(1)通过生物信息学分析S100A8/S100A9在神经母细胞瘤中的表达情况(2)将课题组已构建的带有绿色荧光标记的重组质粒[过表达组:S100A8-SBIpiggbac(SBI-S100A8)和S100A9-SBI-piggbac(SBI-S100A9);低表达组:shRNAS100A8(shS100A8或shA8)和shRNA-S100A9(shS100A9或shA9)]转染NB细胞系SH-SY5Y细胞,经过嘌呤霉素筛选后,构建出过表达S100A8/A9和低表达S100A8/A9蛋白的稳转细胞株。(3)平板克隆实验观察NB的增殖;划痕、Transwell迁移和侵袭实验观察NB的迁移和侵袭能力,裸鼠皮下成瘤观察肿瘤组织的生长。(4)利用腺病毒AdGFP、AdRFP、Adsiβ-catenin和Adβ-catenin处理NB细胞系及其稳转株。(5)Western blotting检测S100A8、S100A9和β-catenin蛋白。结果:(1)生物信息学分析结果表明S100A8/A9蛋白在神经母细胞瘤中高表达。(2)分子实验和荧光表达证明稳转株构建成功。(3)Transwell迁移和侵袭实验、划痕、平板克隆实验结果:S100A8、S100A9和β-catenin蛋白过表达的神经母细胞瘤与对照组相比其增殖和迁移能力增强(P<0.05),低表达的神经母细胞瘤与对照组相比其增殖和迁移能力下降(P<0.05)。(4)Transwell迁移和侵袭实验、划痕实验、平板克隆实验结果:S100A8/A9高表达而β-catenin蛋白低表达时,神经母细胞瘤的增殖和迁移能力与S100A8/A9过表达组相比下降(P<0.05)。(5)裸鼠皮下成瘤实验表明:S100A8、S100A9和β-catenin蛋白高表达组神经母细胞瘤的生长明显增大,与低表达组和对照组相比有差异(P<0.05)。(6)裸鼠皮下成瘤实验同时表明:S100A8/A9高表达而β-catenin蛋白低表达时,与S100A8/A9高表达组相比神经母细胞瘤的生长受到了一定的抑制。结论:(1)上述的结果表明,高表达的S100A8、S100A9和β-catenin蛋白可诱导神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y的生长、迁移和侵袭,低表达则会产生抑制。(2)S100A8/A9促进神经母细胞瘤的增殖和迁移是通过影响β-catenin使其高表达,S100A8/A9通过激活WNT经典途径激活β-catenin从而对神经母细胞瘤进行正反馈调控。说明S100A8/A9通过WNT/β-catenin通路影响神经母细胞瘤的进展,对神经母细胞瘤进程起到促进作用。