【摘 要】
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该项研究采用国外新近建立的一种对可能调控神经递质释放的蛋白分子进行功能研究的实验方法一PCl2细胞分泌分析系统对SNAP- 29分子在胞吐中可能起的调节功能做进一步的研究.
【出 处】
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上海第二医科大学 上海交通大学医学院 上海交通大学
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该项研究采用国外新近建立的一种对可能调控神经递质释放的蛋白分子进行功能研究的实验方法一PCl2细胞分泌分析系统对SNAP- 29分子在胞吐中可能起的调节功能做进一步的研究.该系统可以研究各种蛋白在胞吐(exocytosis)过程中的作用.该方法是将编码hGH(人生长激素)的质粒和编码所感兴趣蛋白的质粒瞬时共转染PC12细胞,在转染后细胞中,hGH可作为胞吐的一个报告物,当PC12细胞受到刺激后,hGH会分泌出来,感兴趣蛋白对hGH分泌的影响反映了它对胞吐过程起的作用.该项研究首先对PC12细胞的转染条件进行了优化,分别观察了细胞铺板密度、DNA 数量、DNA与脂质体的比例对转染效率的影响.同时采用表达绿色荧光蛋白的商品化质粒载体pEGFP-N3转染PCl2细胞,利用绿色荧光蛋白作为报s告物来检测PCI2细胞的转染效率,确立了最佳转染条件:6孔板每孔种1.5×10<6>个PC12细胞,DNA总量为4.5ug,DNA与阳离子脂质体Lipofectamine2000比率为1:2.5(即脂质体使用11.25ug).接着又对共转染效率进行了验证,因为共转染效率高低是该项实验的关键.最后通过建立PC12细胞分泌分析系统,对SNAP- 29分子功能进行研究.通过该功能实验可以推测SNAP-29分子在神经递质的释放过程中有抑制作用,是神经递质释放过程中的一个调控蛋白.这为进一步阐明SNAP-29分子的功能提供了一个有力的证据.
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