本文首先将小金海棠MxIRT1去信号肽和可变区区域的IRT基因转化不同二价金属离子转运体的酵母突变株,通过营养缺陷筛选刚性转化子。运用电感耦合等离子体质谱仪对不同载体转化的酵母细胞进行了体内各种离子含量的测定,结合酵母的异源互补法结果证实了MxIRT1能够转运二价金属阳离子,但转运效率不同。MxIRT1对Zn、Fe的吸收有一定作用；通过对去信号肽和可变区的MxIRTI的研究表明,1)MxIRT1前端约105 bp的信号肽序列,它的缺失推测会影响到蛋白的功能。2)存在于跨膜结构域Ⅲ、Ⅳ之间的富含组氨酸的可变区对于Zn、Fe的转运有一定作用。它的缺失导致酵母对Zn的吸收量有明显下降。对Fe的影响在吸收量和细胞生长状态上也比较明显。同时通过非损伤微测系统发现在水稻小苗中,转IRT正义的水稻根毛在缺铁时向外分泌H+,而野生型没有此现象。这种情况在酵母中同样发现,并且去信号肽和完整MxIRT1的酵母也有此现象,但是去可变区的MxIRT1的酵母在缺铁情况下与有铁情况下并没有区别,并没有向外分泌H+离子。这表明MxIRT1缺铁的情况下向外分泌H+离子,起作用的部位可能是可变环,信号肽有轻微的影响,从而在缺铁条件下促进对铁的吸收。 从8万株水稻种子中以100株为单位提DNA,建立DNA库,然后通过巢式PCR进行第一轮筛选,挑选出刚性结果,再将挑选出的单株水稻培养,进行第二轮筛选,直到筛选出阳性结果的单株水稻。