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为实现猪伪狂犬病毒(Pseudorabies，PRV)、猪瘟病毒(Classical swine fever virus，CSFV)、猪流行性日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus，JEV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV)、猪圆环病毒2型（Porcine circovirus type2，PCV-2）、非洲猪瘟病毒(African swine fever virus，ASFV)、猪细小病毒(Porcine parv凝胶电泳及液相芯片高通量检测技术在动物疫病诊断中的应用。
首先，针对PRV-gB、JEV-NS5、CSFV-5URT、PCV-2-ORF1、PRRSV-ORF6、PPV-VP1及ASFV-P72基因序列，分别设计7对特异引物，在特异性引物的上、下游5端均添加一段非同源性的标签序列，形成特异性复合引物，并根据标签序列合成一对用于识别标签的通用引物，下游通用引物5端添加生物素标记;根据各扩增序列分别设计7条特异性的探针，并在各探针的5端修饰氨基与12个碳臂，用于与羧基磁性微球的共价偶联。其次，依据PCR扩增产物条带大小，将其分成两组，采用普通凝胶电泳技术，对多重扩增反应体系进行初步探讨。再利用毛细管凝胶电泳的高分辨率优势，对7重反应的条件的两个阶段退火温度，特异性引物浓度和通用引物浓度进行直接同步优化，确立PRRSV、CSFV、JEV、PCV、PRV、PPV与ASFV7重PCR的最优扩增条件，从而建立多重PCR与毛细管凝胶电泳分析系统(PCR-QIAxcel)的联用;基于7重PCR扩增体系，应用Bio-Plex液相芯片分析系统，通过杂交反应条件的优化，构建了7种猪病毒性疫病Bio-Plex液相芯片检测平台(PCR-Bio-Plex)，并对两种方法的交叉特异性、灵敏性及反应的重复性进行探讨。最后，将本文所建立的两种检测方法在临床样本的检测中进行应用，并对其进行综合评估分析。
结果显示最终确立PCR扩增中最优特异性引物终浓度为0.056μmol/L/条，通用引物的终浓度为0.64μmol/L/条，两个阶段的退火温度分别为56℃、51℃，Bio-Plex杂交体系的最优杂交程序为57℃杂交30min，采用最优的反应条件，PCR-QIAxcel对PRV、CSFV、JEV、PCV-2、PRRSV、ASFV、PPV的最低检测量分别为:4.56×103、6.35×103、1.98×103、1.32×104、3.21×103、4.51×103、3.37×103拷贝/μL，PCR-Bio-Plex对上述7种病毒最低的检测限度分别为:2.81×102、2.34×102、2.98×102、2.31×102、2.22×103、2.54×103、2.33×103拷贝/μL。特异性试验结果显示，PCR-QIAxcel及PCR-Bio-Plex的特异性均较高，且与其他病毒无交叉反应。65份临床样本的检测结果显示PCR-QIAxcel共检出47份阳性样本，检出率为88.7％(47/53)，PCR-Bio-Plex共检出49份阳性样本，检出率为92.5％(49/53)。PCR-QIAxcel与PCR-Bio-Plex检测结果符合率为95.9％(47/49)。
本文通过反应条件优化，成功建立了PRV、CSFV、JEV、PCV-2、PRRSV、PPV、ASFV7种病毒PCR-QIAxcel毛细管凝胶电泳及PCR-Bio-Plex液相芯片的检测方法，并对两种方法进行了评估和分析。PCR-QIAxcel与PCR-Bio-Plex检测方法高效、灵活、准确、特异较强、灵敏度较高，Bio-Plex的灵敏度高于QIAxcel约1-2个量级。本文为混合感染的检测方法提供新手段，为对抗外来疫病的检疫、监控提供新思路，对临床样品的快速、准确诊断提供参考，同时，促进高通量检测技术在动物疫病监控的应用与发展，为动物疫病高通量检测技术提供新方向。
首先，针对PRV-gB、JEV-NS5、CSFV-5URT、PCV-2-ORF1、PRRSV-ORF6、PPV-VP1及ASFV-P72基因序列，分别设计7对特异引物，在特异性引物的上、下游5端均添加一段非同源性的标签序列，形成特异性复合引物，并根据标签序列合成一对用于识别标签的通用引物，下游通用引物5端添加生物素标记;根据各扩增序列分别设计7条特异性的探针，并在各探针的5端修饰氨基与12个碳臂，用于与羧基磁性微球的共价偶联。其次，依据PCR扩增产物条带大小，将其分成两组，采用普通凝胶电泳技术，对多重扩增反应体系进行初步探讨。再利用毛细管凝胶电泳的高分辨率优势，对7重反应的条件的两个阶段退火温度，特异性引物浓度和通用引物浓度进行直接同步优化，确立PRRSV、CSFV、JEV、PCV、PRV、PPV与ASFV7重PCR的最优扩增条件，从而建立多重PCR与毛细管凝胶电泳分析系统(PCR-QIAxcel)的联用;基于7重PCR扩增体系，应用Bio-Plex液相芯片分析系统，通过杂交反应条件的优化，构建了7种猪病毒性疫病Bio-Plex液相芯片检测平台(PCR-Bio-Plex)，并对两种方法的交叉特异性、灵敏性及反应的重复性进行探讨。最后，将本文所建立的两种检测方法在临床样本的检测中进行应用，并对其进行综合评估分析。
结果显示最终确立PCR扩增中最优特异性引物终浓度为0.056μmol/L/条，通用引物的终浓度为0.64μmol/L/条，两个阶段的退火温度分别为56℃、51℃，Bio-Plex杂交体系的最优杂交程序为57℃杂交30min，采用最优的反应条件，PCR-QIAxcel对PRV、CSFV、JEV、PCV-2、PRRSV、ASFV、PPV的最低检测量分别为:4.56×103、6.35×103、1.98×103、1.32×104、3.21×103、4.51×103、3.37×103拷贝/μL，PCR-Bio-Plex对上述7种病毒最低的检测限度分别为:2.81×102、2.34×102、2.98×102、2.31×102、2.22×103、2.54×103、2.33×103拷贝/μL。特异性试验结果显示，PCR-QIAxcel及PCR-Bio-Plex的特异性均较高，且与其他病毒无交叉反应。65份临床样本的检测结果显示PCR-QIAxcel共检出47份阳性样本，检出率为88.7％(47/53)，PCR-Bio-Plex共检出49份阳性样本，检出率为92.5％(49/53)。PCR-QIAxcel与PCR-Bio-Plex检测结果符合率为95.9％(47/49)。
本文通过反应条件优化，成功建立了PRV、CSFV、JEV、PCV-2、PRRSV、PPV、ASFV7种病毒PCR-QIAxcel毛细管凝胶电泳及PCR-Bio-Plex液相芯片的检测方法，并对两种方法进行了评估和分析。PCR-QIAxcel与PCR-Bio-Plex检测方法高效、灵活、准确、特异较强、灵敏度较高，Bio-Plex的灵敏度高于QIAxcel约1-2个量级。本文为混合感染的检测方法提供新手段，为对抗外来疫病的检疫、监控提供新思路，对临床样品的快速、准确诊断提供参考，同时，促进高通量检测技术在动物疫病监控的应用与发展，为动物疫病高通量检测技术提供新方向。