【目的】为提高分离自藏灵菇的鼠李糖乳杆菌zrx01产细菌素的能力，对其产细菌素的发酵条件进行优化，并分析其抑菌活性。【方法】采用单因素试验，分析鼠李糖乳杆菌zrx01产细菌素的最适发酵条件，即发酵时间、温度、培养基初始pH值、接种量等4个因素对其产细菌素能力的影响，在此基础上利用Box-Behnken法设计四因素三水平正交试验进行响应面优化，利用优化条件提取细菌素并对大肠杆菌进行抑菌试验。【结果】响应面法优化的鼠李糖乳杆菌zrx01产细菌素的最佳发酵条件为发酵时间20 h、发酵温度35 ℃、培养基初始pH 6.5、接种量2.5%(体积比)，此时细菌素的相对效价为（242.02±10.24） AU/mL，比优化前的相对效价（118.40±10.36） AU/mL提高了104.41%。获得的发酵上清液用乙酸乙酯萃取浓缩，作用于大肠杆菌指示菌和鼠李糖乳杆菌zrx01 8 h，鼠李糖乳杆菌zrx01不产生抑菌圈，而大肠杆菌抑菌圈明显。扫描电镜显示，该细菌素对鼠李糖乳杆菌zrx01自身无作用，但可使大肠杆菌的菌体表面形成孔洞，从而抑制大肠杆菌的生长。【结论】分离自藏灵菇中的鼠李糖乳杆菌zrx01所产细菌素，在食品防腐方面具有很好的应用前景。