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第一部分长链非编码RNA BCYRN1在胃癌组织中的表达情况及生物学功能研究目的:检测胃癌组织中lncRNABCYRN1表达情况,并分析其与胃癌患者临床病理参数之间的关系;体外调控BCYRN1基因的表达水平,进行相关细胞功能实验,寻找下游靶基因,探究BCYRN1在胃癌中发挥的生物学功能和调控机制。方法:1.采用实时荧光定量聚合酶链反应方法(qRT-PCR)检测lncRNA BCYRN1在56例胃癌患者癌组织及癌旁组织中的表达水平,收集患者临床病理资料,分析BCYRN1表达水平与患者临床病理参数之间的关系。2.采用脂质体2000将含BCYRN1的质粒和空白质粒转染到BGC-823和SGC-7901细胞,将si-BCYRN1或si-NC转染到AGS细胞中。采用qRT-PCR方法检测转染效率;采用CCK-8、细胞平板克隆形成实验、transwell实验以及流式细胞术检测细胞周期和凋亡,检测细胞增殖、迁移、凋亡等情况的变化。3.用qRT-PCR检测胃癌患者癌组织中EpCAM的表达水平,分析与BCYRN1表达之间的相关性;过表达或低表达BCYRN1后,检测EpCAM的mRNA和蛋白质的含量变化。结果:1.lncRNABCYRN1在胃癌癌组织中表达量高于癌旁组织(P<0.0001),其表达水平与肿瘤的TNM分期有关,与年龄、性别、肿瘤大小、远处转移等其他临床病理参数无关。2.在BGC-823和SGC-7901中,转染pcDNA-BCYRN1组比转染empty vector组的BCYRN1表达量明显升高(P均<0.0001);在AGS细胞系中,转染si-BCYRN1组比si-NC组的BCYRN1表达量显著降低(P<0.01);CCK-8结果显示,与阴性对照组相比,过表达了 BCYRN1的细胞在检测的48小时、72小时增殖速度明显增加(P均<0.05);在进行低表达的细胞中,si-BCYRN1组其增殖速度在检测的第48、72小时较对照组有明显降低(P均<0.05);过表达BCYRN1的细胞形成的克隆数多于阴性对照组(BGC-823细胞中P<0.01,SGC-7901细胞中P<0.05),低表达目的基因的AGS细胞形成的克隆数目少于阴性对照组(P<0.01);过表达BCYRN1的细胞其细胞周期G1/G0期出现明显的降低(BGC-823:P<0.001,SGC-7901:P<0.01),S 期和 G2/M 期显著增加(BGC-823:P<0.01,SGC-7901:P<0.05),在 AGS 细胞中,BCYRN1的低表达引起了 G2/M期的显著降低(P<0.0001)和G1/G0期的增加(P<0.01);高表达了 BCYRN1的细胞在经历了无血清处理后其早期凋亡的细胞少于对照组(BGC-823:P<0.001,SGC-7901:P<0.01),干扰 BCYRN1 表达后,早期凋亡的AGS细胞比对照组有所增加(P<0.01);在Transwell实验中,高表达了BCYRN1的细胞穿膜细胞数高于阴性组(P均<0.05);抑制BCYRN1表达穿膜细胞数低于阴性对照(P<0.01)。差异均有统计学意义。3.BCYRN1和EpCAM在胃癌癌组织中的表达呈正相关(r=0.468,P<0.01)。在上调了 BCYRN1的BGC-823及SGC-7901两种细胞中EpCAM的mRNA表达水平均显著增高,抑制BCYRN1表达的AGS细胞中EpCAM的mRNA明显降低;western blot实验提示蛋白变化与mRNA的变化趋势一致。结论:lncRNABCYRN1在胃癌中高表达,有促进细胞增殖、迁移,增强细胞耐缺血清环境的能力,同时可调节EpCAM的表达,在胃癌中发挥癌基因的作用。第二部分血清长链非编码RNA BCYRN1的检测及其对胃癌诊断和预后价值的评估目的:检测胃癌患者血清中长链非编码RNA(lncRNA)BCYRN1表达水平,分析其与患者临床特征的关系,探讨其在胃癌诊断中的价值。方法:1.采用病例对照研究方法。采用qRT-PCR对2014年11月至2015年7月山东大学齐鲁医院收治的124例胃癌患者、41例萎缩型胃炎患者、59名健康体检者血清中的lncRNABCYRN1的表达水平进行检测。2.采用电化学发光免疫分析法检测血清中癌胚抗原(CEA)、糖类抗原72-4(CA72-4)。3.对31例成功接受胃癌根治术的患者手术前及术后3、7、10、30、100 d血清lncRNABCYRN1水平进行动态监测。4.应用ROC曲线分析lncRNABCYRN1、CEA及CA72-4诊断胃癌的敏感度和特异度。两组间比较采用Mann-Whitney U检验,多组间比较采用Kruskal-Wallis H检验。结果:1.胃癌患者血清BCYRN1表达水平Ⅰ + Ⅱ期组[1.041(0.794,1.462)]及Ⅲ + Ⅳ期组[1.290(0.978,1.794)]较癌前病变组[0.969(0.699,1.219)]、健康对照组[0.801(0.556,1.599)]有明显升高(H=54.68,P<0.0001)。2.与术前[1.120(0.859,1.663)]相比,胃癌患者血清lncRNA BCYRN1表达水平在术后 10 d[0.903(0.724,1.182)](U=55.0,P<0.0001)、30 d[0.759(0.671,1.037)](U=299.0,P=0.0261)、100 d[0.478(0.378,0.635)](U=41.0,P<0.0001)均有显著降低。3.血清lncRNA BCYRN1诊断胃癌的曲线下面积(AUC)为0.865,高于CA72-4(AUC=0.699)及 CEA(AUC=0.807)。三者联合检测 AUC 为 0.934。结论:胃癌患者血清中lncRNA BCYRN1表达水平明显升高,lncRNA BCYRN1有望作为胃癌诊断及疗效监测的潜在生物标志物。