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[目的]脓毒症急性肾损伤(septic acute kidney injury,SAKI)是重症监护室中常见的一种危重疾病,其发病率及死亡率居高不下,但发病机制尚未明确。其中,细胞凋亡学说在脓毒症急性肾损伤中的作用越来越受到重视,多项临床及动物实验显示,脓毒症发生时,机体处于相对肾上腺皮质功能不全(relative adrenal insufficiency,RAI)的状态,小剂量糖皮质激素可以保护SAKI中的肾功能。本实验拟构建SAKI小鼠模型,采用Ac-DEVD-CHO(Caspase-3特异性抑制剂)联合小剂量甲强龙早期干预,通过ELISA检测小鼠血清中炎症因子TNF-α、急性肾损伤标志物NGAL(中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白,载脂蛋白-2)以及Western Blot检测肾脏凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2表达,比较二者单独干预与联合干预措施对SAKI小鼠模型的肾保护作用及机制,为临床治疗SAKI提供新的治疗靶点和理论依据。[方法]清洁级雄性C57BL/6小鼠72只,采用盲肠结扎穿孔(Cecal Ligation and Puncture,CLP)法,构建SAKI模型,随机分为6组(n=12),①假手术对照组(sham group);②盲肠结扎穿孔组(CLP group);③DMSO对照组(DMSO group);④小剂量甲泼尼龙早期干预组(GC group);⑤Caspase-3抑制剂Ac-DEVD-CHO早期干预组(CHO group);⑥Caspase-3抑制剂Ac-DEVD-CHO联合小剂量甲强龙组(CHO+GC group)。各组术后都给予37℃生理盐水0.3ml/10g股部皮下注射行液体复苏。六组小鼠分别于术后6h、12h、24h通过摘眼球法取血,使用ELISA方法测定血清中的TNF-α、NGAL浓度;同时各组使用磷酸盐缓冲液灌注后取出小鼠肾脏,使用Western-Blot方法测定肾脏中凋亡蛋白Bax、Bcl-2的表达。ELISA结果分析使用酶标仪在450nm波长下测量各孔的光密度(optical density,OD)值,Western-Blot条带图像灰度值测量分析采用Gel-pro软件包分析。数据统计分析采用SPSS20.0版软件包(SPSS Company,Chicago,IllinoisUSA)进行;数据均以均数土标准差(x±s)表示,统计方法采用重复测量资料的方差分析,P≤0.05为差异有统计学意义。[结果]1.各组小鼠血清TNF-α及血清NGAL结果:6h、12h、24h小鼠CLP组和DMSO对照组血清TNF-α及血清NGAL表达无明显差异(P>0.05)。6hCLP组、CHO组TNF-α较Sham组有明显升高(P<0.01);GC组较CLP组TNF-α有明显降低(P<0.01),GC+CHO组较GC组有降低趋势,较Sham组有升高趋势,但无统计学差异(P>O.05);12h、24hSham组血清TNF-α较6h组有升高趋势,但无统计学差异(P<0.05);12hCLP组较6hCLP组血清TNF-α有明显升高,24hCLP组较12h CLP组血清TNF-α有明显升高(P<0.01);12hGC组较12hCLP组有明显降低(P<0.01);12hGC+CHO组较12hGC组有明显降低(P<0.01);12hGC组和GC+CHO组较6h组有升高趋势,但无统计学差异(P>0.05);24hGC组较24hCLP组有明显降低(P<0.01);24hGC+CHO组较24h GC组有明显降低(P<0.01);24hGC组和GC+CHO组较12h组有升高趋势,但无统计学差异(P>0.05)。12hCLP组较6hCLP组血清NGAL有明显升高(P<0.01),24hCLP组较12hCLP组血清NGAL有明显降低(P<0.01),与6hCLP手术组无统计学差异(P>0.05),各个时间组CLP组较Sham组NGAL都有明显升高(P<0.01),GC组较CLP组血清NGAL有降低趋势,但无统计学差异(P>0.05);CHO组较CLP组血清NGAL有明显降低(P<0.01),GC+CHO组较CHO组有降低趋势,但无统计学差异(P>0.05)。2.各组小鼠肾组织凋亡相关蛋白Bax及Bcl-2表达结果:6h和12h的Bax/actin比值比较中,CLP组最高,GC+CHO组最低,其中CLP组与Sham组比较Bax表达升高有统计学意义(P<0.05)。CHO组及GC+CHO组与CLP组比较Bax表达降低差异有统计学意义(P<0.05)。GC+CHO组与DMSO组比较Bax表达降低有统计学意义(P<0.05)。GC+CHO组较CHO组有降低趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。24h的Bax/β-actin比值比较中,Sham组最高,CLP组其次,GC+CHO组较CLP组升高有统计学意义(P<0.05),CHO组较CLP组降低趋势,其余各组间均无统计学差异(P>0.05)。6h和12h的Bcl-2/β-actin比值比较中,GC+CHO组最高,CHO组其次,DMSO组最低。CHO组及GC+CHO组与DMSO组比Bcl-2表达增高均有统计学意义(P<0.05);GC+CHO组较CHO组有升高趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。24h的Bcl-2/β-actin比值比较中,GC+CHO组最高,CHO组其次,CLP组最低。各组间均无统计学差异(P<0.05),GC+CHO组较CHO组有升高趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。[结论]1.单独使用小剂量甲强龙早期干预脓毒症相关肾损伤小鼠模型,可以减少炎性因子TNF-α的释放,减轻小鼠SAKI模型的肾损伤;2.单独使用Caspase-3抑制剂Ac-DEVD-CHO早期干预小鼠脓毒症急性肾损伤模型,可以减轻小鼠肾脏细胞凋亡,进而减轻小鼠SAKI模型的肾损伤;3.Caspase-3抑制剂Ac-DEVD-CHO和小剂量甲强龙联合应用时,比单独使用其中一种药物能更有效的减少小鼠脓毒症急性肾损伤模型肾脏细胞凋亡、炎症因子TNF-α释放,降低血清NGAL,更好的减轻小鼠SAKI模型的肾损伤。