【摘 要】
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表达去除SD0803 E2基因跨膜疏水区的sE2蛋白并制备其抗体,为猪源BVDV诊断奠定基础.RT-PCR扩增SD0803株sE2基因,构建重组原核表达载体pGEX-4T-1-sE2,转化BL21(DE3),IPTG诱导蛋
【机 构】
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四川农业大学动物医学院,四川雅安625014中国农业科学院上海兽医研究所,上海200241;西昌学院动物科学学院,四川西昌615000;中国农业科学院上海兽医研究所,上海200241;南京农业大学动物
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表达去除SD0803 E2基因跨膜疏水区的sE2蛋白并制备其抗体,为猪源BVDV诊断奠定基础.RT-PCR扩增SD0803株sE2基因,构建重组原核表达载体pGEX-4T-1-sE2,转化BL21(DE3),IPTG诱导蛋白表达,以纯化的重组蛋白为抗原免疫家兔制备多克隆抗体.采用间接ELISA、Western blot、间接免疫荧光等方法鉴定获得的抗体.结果显示,抗体效价最高可达1∶256 000;制备的抗体可与rsE2蛋白特异性结合；该抗体可特异性识别BVDV感染MDBK细胞表达的E2蛋白,显示抗体高度的特异性.成功构建pGEX-4T-1-sE2原核表达质粒,诱导其表达的蛋白免疫家兔,成功制备的猪源BVDV SD0803株E2抗体.
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