【摘 要】
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对新孢子虫过氧化物酶1（NcPrx1）重组蛋白（rNcPrx1）进行原核表达并分析其在新孢子虫速殖子和外分泌抗原中的表达情况;通过细胞增殖与毒性试验、ELISA和Western blot等多种手段筛选rNcPrx1安全浓度,检测rNcPrx1刺激巨噬细胞后促炎细胞因子IL-6、IL-12和TNF-α的分泌水平,TLR2、以及丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）和蛋白激酶B（AKT）信号通路相关蛋白表达及
【基金项目】
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国家“973”计划资助项目（2015CB150300）；
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对新孢子虫过氧化物酶1（NcPrx1）重组蛋白（rNcPrx1）进行原核表达并分析其在新孢子虫速殖子和外分泌抗原中的表达情况;通过细胞增殖与毒性试验、ELISA和Western blot等多种手段筛选rNcPrx1安全浓度,检测rNcPrx1刺激巨噬细胞后促炎细胞因子IL-6、IL-12和TNF-α的分泌水平,TLR2、以及丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）和蛋白激酶B（AKT）信号通路相关蛋白表达及磷酸化水平的变化情况等;进一步利用TLR2-/-小鼠腹腔巨噬细胞和相关通路抑制剂明确rNcPrx1调控细胞因子分泌的信号通路。结果显示:成功构建pET-28a-NcPrx1原核表达载体,并纯化获得大小为28 kDa的rNcPrx1蛋白;免疫小鼠获得NcPrx1多克隆抗体,发现该蛋白可分泌于新孢子虫外分泌抗原中。rNcPrx1刺激小鼠腹腔巨噬细胞的安全质量浓度为20 mg/L,该质量浓度的rNcPrx1增加了TLR2的转录水平和表达水平,促进了IL-6、IL-12和TNF-α的分泌量,并显著提高小鼠腹腔巨噬细胞p38、ERK及AKT蛋白的磷酸化水平。与野生型小鼠腹腔巨噬细胞相比,TLR2缺失降低了细胞中IL-6、IL-12和TNF-α的分泌;此外,rNcPrx1刺激细胞后,p38、ERK和AKT的磷酸化水平在TLR2-/-小鼠腹腔巨噬细胞中降低;p38、ERK和AKT抑制剂抑制rNcPrx1诱导的IL-6、IL-12和TNF-α分泌量。结果表明,新孢子虫NcPrx1能够通过TLR2激活MAPK和AKT信号通路,从而诱导小鼠巨噬细胞IL-6、IL-12和TNF-α的分泌,为阐明NcPrx1蛋白功能及宿主抗新孢子虫免疫提供重要参考。
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