【摘 要】
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目的使用CY5荧光标记引物建立定量检测I型Sabin株脊髓灰质炎病毒480-A和525-C突变率的MAPREC。方法提取I型Sabin株脊髓灰质炎病毒样品RNA,反转录合成c DNA后,进行非对称PCR扩
【机 构】
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中国食品药品检定研究院呼吸道病毒疫苗室,国家食品药品监督管理总局食品药品审核查验中心药品化妆品核查处,北京天坛生物制品有限公司质量保证部
【基金项目】
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国家国际科技合作专项(2013DFA31680);国家科技重大专项(2015ZX09101044)
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目的使用CY5荧光标记引物建立定量检测I型Sabin株脊髓灰质炎病毒480-A和525-C突变率的MAPREC。方法提取I型Sabin株脊髓灰质炎病毒样品RNA,反转录合成c DNA后,进行非对称PCR扩增以生成单链DNA,之后采用CY5荧光标记引物进行一步扩增反应以合成双链产物,以DNA内切酶Dde I和Nci I酶切后电泳分离,获取荧光信号,计算样品的突变率。检测4个国际标准品（100%DNA突变标准品、IS DNA标准品、LMVR标准品和HMVR标准品）的突变率,重复5次,验证方法的准确性和精密度,
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