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目的
通过小分子干扰(siRNA)技术沉默大鼠胰岛微血管内皮细胞(IMECs)的钙非依赖型磷脂酶A2(iPLA2)基因，研究不同葡萄糖浓度对IMECs iPLA2表达的影响及其与细胞凋亡之间的关系。
方法通过分离纯化大鼠胰岛，获取IMECs细胞，采用随机数余数分组法将其分为正常糖组(5 mmol/L)、恒定高糖组(28 mmol/L)及间歇高糖组(每24小时轮换培养于5 mmol/L或28 mmol/L葡萄糖)；通过实时定量聚合酶链反应(RT–PCR)检测葡萄糖浓度分别为恒定的5 mmol/L、28 mmol/L以及每24小时轮换的5 mmol/L或28 mmol/L培养条件下的IMECs iPLA2的基因表达；合成iPLA2的RNA干扰序列并转染至IMECs中，通过RT–PCR验证其是否转染成功；采用细胞DNA片段化检测和膜联蛋白V–异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin V/PI)流式细胞仪检测不同葡萄糖浓度条件下IMECs的凋亡。组间两两比较采用LSD检验，凋亡率采用随机区组设计的两因素ANOVA分析。
结果RT–PCR检测显示各组细胞iPLA2基因表达逐渐减弱，依次为1.90±0.23、0.90±0.05及0.23±0.03，且各组间差异有统计学意义(P<0.05)。成功合成并转染iPLA2 siRNA后，IMECs间歇性葡萄糖培养组较正常糖组及恒定高糖组DNA片段化更为明显，间歇高糖组流式细胞凋亡率较正常糖组升高，差异有统计学意义(44.9±2.7比3.1±1.0，P<0.05)。
结论间歇性高糖环境可抑制IMECs iPLA2基因表达，且通过小分子干扰技术抑制iPLA2基因表达能够促进细胞的凋亡，提示iPLA2表达减弱可能参与了间歇性高糖诱导的IMECs凋亡过程。