论文部分内容阅读
目的 设计和筛选有效抑制纤维母细胞生长因子受体3基因(FGFR3)表达的siRNA序列,构建相应表达载体,研究其对肝癌细胞HepG2生物学特性的影响.方法 根据FGFR3序列,设计3条siRNA序列及1条对照序列:以pRNAT-U 6.1/Neo为载体,并以载体中同时构建的绿色荧光蛋白(GFP)基因编码序列为转染效率内参照;采用脂质体法将pRNAT-U 6.1/Neo-siRNA转染肝癌细胞HepG2;以实时荧光定量PCR(Real time PCR)检测FGFR3的mRNA表达变化,Western印迹法检测FGFR3蛋白质表达变化;[3H]胸腺嘧啶脱氧核苷掺入法(3H-Tdr)和细胞克隆形成法分析DNA合成变化及细胞生长能力.结果 所设计合成的3条siRNA序列中均能抑制FGFR3的表达,对mRNA表达抑制率约为74.04%～87.25%,在蛋白质水平表达抑制率为19.65%～90.40%.转染siRNA后,HepG2的细胞克隆形成能力和DNA合成能力明显受到抑制.结论 siRNA能够有效抑制肝癌细胞FGFR3的表达,并继而抑制肝癌细胞的DNA合成和生长,能够为肝癌基因表达调控研究提供新的靶基因。