【摘 要】
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背景与目的:消减杂交技术是一种寻找和克隆差异基因的方法.本研究目的是通过快速、高质量构建消减cDNA文库,筛选K562细胞中差异表达基因.方法:以用限制性显示(restriction di
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背景与目的:消减杂交技术是一种寻找和克隆差异基因的方法.本研究目的是通过快速、高质量构建消减cDNA文库,筛选K562细胞中差异表达基因.方法:以用限制性显示(restriction display,RD)技术制备的K562细胞cDNA片段作为消减对象,以正常人淋巴细胞的Sau3A Ⅰ酶解cDNA片段对其进行消减.经过消减后的RD片段被分组扩增出来,并克隆于T载体中,挑选阳性克隆进行测序并进行初步分析.结果:构建的K562细胞消减cDNA文库,包含360个阳性克隆,插入片断大小范围在200～800 bp之间,选取50个克隆进行测序分析,结果为来源于42个已知基因.结论:利用自行建立的消减杂交法,成功构建了特异性K562细胞消减cDNA文库,文库质量可靠,可用于进一步筛选及克隆K562细胞中差异表达基因.
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