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目的 构建针对人SET-和MYND-结构域含有蛋白3(SMYD3)基因的短发夹状RNA(shRNA)表达载体pGenesil-1-s,观察其对人肝癌细胞株HepG2细胞SMYD3基因表达的特异性抑制效应.方法设计合成针对SMYD3 mRNA编码序列267～288、302～323靶位点之间的核苷酸片断,并定向克隆到仅表达EGFP的空载体pGenesil-1的U6启动子下,构建重组质粒pGenesil-1-s1、pGenesil-1-s2;不针对任何序列的重组质粒pGenesil-1-hk作为对照.通过脂质体介导转染入肝癌细胞株H epG 2,应用逆转录聚合酶链反应、western blot蛋白免疫印迹法分别从mRNA、蛋白水平检测阻抑效应.结果酶切鉴定和测序结果证实了pGenesil-1-sl、pGenesil-1-s2、pGenesil-1-hk的成功构建,转染HepG2细胞后,pGenesil-1-sl、pGenesil-1-s2组SMYD3 mRNA和蛋白表达均明显下调,与pGenesil-1-hk组及pGenesil-1对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论构建的重组质粒pGenesil-1-sl、pGenesil-1-s2能特异性抑制SMYD3在HepG2细胞中的表达。