【摘 要】
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目的探讨转录因子环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)在蛋白激酶A(PKA)信号防止足细胞损伤中的作用。方法使用条件永恒的小鼠足细胞株(5P12)14~25代分化的足细胞进行研究,细胞分
【机 构】
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上海交通大学医学院附属仁济医院肾脏科分子细胞肾病实验室
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目的探讨转录因子环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)在蛋白激酶A(PKA)信号防止足细胞损伤中的作用。方法使用条件永恒的小鼠足细胞株(5P12)14~25代分化的足细胞进行研究,细胞分为对照组、阿霉素(ADR)处理组(ADR组)和PKA特异性激动剂(pCPT-cAMP)预孵育+ADR刺激组(pCPT-cAMP+ADR组)。CCK-8法检测细胞毒性;Western blotting检测足细胞内被切割的半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved caspase-3)表达;siRNA抑制细胞内CREB表达,免疫荧光共聚焦显微镜和Western blotting检测磷酸化CREB(p-CREB)的定位和表达。结果 ADR诱导足细胞内cleaved caspase-3表达升高,pCPT-cAMP预孵育可显著降低ADR诱导的cleaved caspase-3表达上升。ADR使足细胞减少为原来的(40.45±6.78)%,pCPT-cAMP预孵育使细胞数量恢复为原来的(69.8±5.48)%。Western blotting检测结果显示:pCPT-cAMP分别预孵育5、15 min可使足细胞总蛋白中p-CREB表达分别上升(105.64±38.21)%和(98.61±41.03)%,细胞核内p-CREB的表达上升(114.52±11.28)%和(118.84±14.44)%。免疫荧光共聚焦显微镜检测显示pCPT-cAMP主要引起细胞核内p-CREB表达上升。siRNA可使足细胞CREB蛋白表达下降为原来的(25.1±2.44)%,且pCPT-cAMP预孵育不能防止ADR诱导的cleaved caspase-3表达升高。结论转录因子CREB介导了PKA信号对足细胞的保护作用。
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