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目的
探讨DiR荧光染料标记的调节性T淋巴细胞(Tregs)在异种肝组织移植小鼠体内的归巢特征。
方法检测不同温育时间和不同质量浓度DiR染料标记的Tregs荧光强度，结合新型四唑化合物(MTS)实验检测细胞活力，从而确定最佳温育时间及染料质量浓度。采用流式细胞术验证DiR染料对Tregs功能及表型的影响。构建异种肝组织移植小鼠模型并免疫重建，回输Tregs后不同时间点进行小动物活体荧光成像。通过免疫组织化学分析免疫重建以及体内淋巴细胞分布情况。多组间比较采用单因素方差分析和Dunnett-t检验。
结果随着DiR浓度和温育时间增加，Tregs荧光强度增强，3 d达到高峰后逐渐减弱，5.00 μg/ml及20.00 μg/ml组相比对照组在各时间点的细胞活力显著下降(F＝120.142～182.025，t＝9.969～19.329，均P<0.05)，温育30 min及60 min后，Tregs活力相较对照组也明显下降(F＝21.826～301.968，t＝6.897～40.016，均P<0.05)，结合MTS实验结果得出最优标记条件为2.50 μg/ml DiR染料温育5 min。免疫表型流式细胞术检测表明DiR染料不影响Tregs表型及功能。小动物荧光成像系统检测到Tregs可以汇聚于移植物区域。免疫组织化学分析结果表明Tregs能改善免疫重建后诱导的淋巴细胞浸润情况。
结论荧光成像可直接观察DiR染料标记的Tregs在小鼠体内的分布，是一种有前景的Tregs示踪的影像学手段。