【摘 要】
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目的 克隆和表达弓形虫虎源分离株(HT株)ROP5蛋白基因.方法 运用RT-PCR技术从弓形虫HT株中扩增出ROP5基因,将其克隆入T载体中进行测序和分析,并将目的基因亚克隆到大肠杆菌表
【机 构】
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吉林省军事医学科学院军事兽医研究所,甘肃省中国农业科学院兰州兽医研究所,中国医学科学院实验动物研究所,东北林业大学野生动物资源学院,黑龙江东北虎林园
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目的 克隆和表达弓形虫虎源分离株(HT株)ROP5蛋白基因.方法 运用RT-PCR技术从弓形虫HT株中扩增出ROP5基因,将其克隆入T载体中进行测序和分析,并将目的基因亚克隆到大肠杆菌表达载体pET28a中进行诱导表达.结果 该基因全长1 650 bp,编码549个氨基酸.其中前24个氨基酸构成信号肽序列.与GenBank中报道的RH株相比,有12个核苷酸有差异,导致7个氨基酸发生改变,两者核苷酸和推导氨基酸序列的同源性分别为99.2%和98.9%.转化重组质粒pETROP5的大肠杆菌BL21(DE3)在IPTG的诱导下,可表达出相对分子质量为64 800的重组蛋白,并且能与弓形虫抗体发生血清学反应,表达量占菌体蛋白的15.6%.结论 成功克隆和表达了弓形虫HT株ROP5蛋白基因,表达的重组蛋白具有良好的反应原性.
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