【摘 要】
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目的:构建含人线粒体亮氨酰tRNA合成酶(mtLeuRS)基因的重组表达载体,表达纯化mtLeuRS并检测其酶促动力学参数.方法:克隆mtLeuRS基因,构建入pET-24a(+)表达载体,转化大肠杆菌B
【机 构】
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第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室,中国科学院生物化学与细胞生物学研究所分子生物学国家重点实验室
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目的:构建含人线粒体亮氨酰tRNA合成酶(mtLeuRS)基因的重组表达载体,表达纯化mtLeuRS并检测其酶促动力学参数.方法:克隆mtLeuRS基因,构建入pET-24a(+)表达载体,转化大肠杆菌BL21-CodonPlus(DE3)-RIL,经诱导产生带6-His标签的mtLeuRS融合蛋白,再经Ni2+亲和层析柱一步法纯化后用酶促反应检测其氨酰化活力.作为mtLeuRS酶促反应底物,人tRNALeu(UUR)由T7 RNA聚合酶体外转录生成.结果:经IPTG诱导,人mtLeuRS蛋白表达量约占细
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