【摘 要】
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纳米抗体是一种新型的蛋白质工程抗体，其体积小、稳定性强、亲和力高等特性为科学研究提供了新的可能性。FLAG标签是一种广泛应用于生物学研究中的短肽标签，在生物学研究中具有重要的作用。为了制备FLAG标签的纳米抗体，利用酵母双杂交技术筛选出具有高亲和力的纳米抗体，并对制备的FLAG纳米抗体进行性能检验。通过DNA重组技术，构建包含FLAG的诱饵载体，利用酵母双杂交技术，在驼源纳米抗体酵母文库中，筛选针
【基金项目】
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北京泰德制药股份有限公司横向课题项目（HT1120221102108）；
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纳米抗体是一种新型的蛋白质工程抗体，其体积小、稳定性强、亲和力高等特性为科学研究提供了新的可能性。FLAG标签是一种广泛应用于生物学研究中的短肽标签，在生物学研究中具有重要的作用。为了制备FLAG标签的纳米抗体，利用酵母双杂交技术筛选出具有高亲和力的纳米抗体，并对制备的FLAG纳米抗体进行性能检验。通过DNA重组技术，构建包含FLAG的诱饵载体，利用酵母双杂交技术，在驼源纳米抗体酵母文库中，筛选针对FLAG标签纳米抗体。在酵母文库中筛选出5个单一的候选抗体DNA序列，为了排除载体本身表达蛋白序列对抗体筛选带来的干扰，通过“点对点”验证方法排除非特异性杂交的可能，通过该操作确认所筛选的5株纳米抗体均能与FLAG标签发生特异性亲和反应。为了制备纳米抗体，构建了5个纳米抗体原核表达载体，并利用大肠杆菌体系进行表达。通过SDS-PAGE和Western杂交（WB）分析，结果显示，成功获得2株可溶性表达的抗FLAG标签蛋白纳米抗体。对这2株纳米抗体与商品化的常规FLAG标签抗体进行效果比对，结果显示制备的2株纳米抗体与商品化抗体均能够识别FLAG多肽及含有FLAG标签的融合蛋白，且在特异性上没有明显区别，表明制备的FLAG纳米抗体具有较好的应用前景。基于酵母双杂交技术，成功筛选并制备了FLAG标签纳米抗体，这一成果不仅丰富了纳米抗体的类型，也为抗体开发及应用提供了新的途径。该研究为进一步研究FLAG标签在生物学研究中的应用，以及纳米抗体在生物工程中的应用提供有力支持。
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