【摘 要】
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利用荧光PCR技术对Crispr/Cas9系统敲除的micro RNA 505小鼠进行鉴定,能快速检测出敲除小鼠的基因型,有效加快敲除小鼠基因功能验证的进程。首先,在Crispr/Cas9系统敲除的基
【机 构】
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东华大学环境科学与工程学院,东华大学化学化工与生物工程学院,复旦大学生命科学学院
【基金项目】
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院国家自然科学基金资助项目（31371257）, 上海市科委关键项目（12140900404, 14140900502）
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利用荧光PCR技术对Crispr/Cas9系统敲除的micro RNA 505小鼠进行鉴定,能快速检测出敲除小鼠的基因型,有效加快敲除小鼠基因功能验证的进程。首先,在Crispr/Cas9系统敲除的基因位点区域设计PCR引物,并在上游引物的5’端使用羟基荧光素（5-carboxyfluorescein,FAM）荧光修饰。模板经过PCR的扩增后,将PCR产物与已知片段大小的6-羧基-X-罗丹明琥珀酰亚胺酯（6-carboxy-X-rhodamine,ROX）混合,在377测序仪上通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离。
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