【摘 要】
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目的 研究同一滴度不同心脏基因转染方法转染携带肌浆网钙ATP酶2a(sarcoplasmic reticulum Ca2+ ATPase 2a,SERCA2a)基因的9型腺相关病毒(adeno-associated virus serotype 9
【机 构】
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新疆医科大学第一附属医院心律失常科,乌鲁木齐,830054新疆医科大学第一附属医院医学研究中心,乌鲁木齐,830054;
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目的 研究同一滴度不同心脏基因转染方法转染携带肌浆网钙ATP酶2a(sarcoplasmic reticulum Ca2+ ATPase 2a,SERCA2a)基因的9型腺相关病毒(adeno-associated virus serotype 9,AAV9)即AAV9-SERCA2a对SD大鼠心肌的有效性及对机体毒副作用的影响.方法 体外成功构建AAV9-SERCA2a-EGFP病毒载体系统,90只雄性SD大鼠随机分为尾静脉注射(tail vein injection,TVI)组、心肌注射(intramyocardial injection,IMI)组、心包腔注射(intrapericardial injection,IPI)组,采用相应方法在体分别转染滴度1×1011vg/mL AAV9-SERCA2a-EGFP、AAV9-EGFP、NS各200 μL.转染后30 d,荧光显微镜下观察心肝肾组织绿色荧光表达情况,Western blot检测SERCA2a基因在大鼠各组织的相对表达量,体表12导联心电图检测心律失常发生率,HE染色观察病理学变化,心脏彩色多普勒超声评价心功能,血液生化学指标检测肝肾功能.结果 三组左心室可见大量绿色荧光表达,IMI组荧光局限在注射点,三组肝肾组织均可见微弱荧光；三组心肌SERCA2a蛋白相对表达量显著高于肝肾(P＜0.01),TVI组和IMI组心肌SERCA2a蛋白相对表达量明显高于IPI组(P ＜0.01)；TVI组和IPI组心电图正常,IMI组2只大鼠发生室性早搏；三组转染AAV9-EGFP、AAV9-SERCA2a-EGFP与转染NS相比,心功能、组织病理学、血液生化学指标差异均无显著性(P＞0.05).结论 三种方法转染滴度1 ×1011vg/mL AAV9-SERCA2a基因,TVI法和IMI法在心肌的有效性优于IPI法,TVI法和IPI法对机体的毒副作用小于IMI法,综合三种方法的有效性和毒副作用评价,TVI法优于IMI法和IPI法.
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