【摘 要】
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目的 EMCV的pEGFP-3C真核表达载体的构建及功能鉴定.方法 RT-PCR扩增EMCV功能蛋白3C基因并克隆至pEGFP-C3载体中,经双酶切和测序鉴定.将重组质粒分别转染到BHK-21细胞和293T细胞48 h后,Western-Blot检测3C蛋白酶的表达,以及对PABP1的切割,共聚焦显微镜观测3C荧光表达位置.结果 EMCV的pEGFP-3C重组质粒经双酶切及测序鉴定构建正确.表达的
【机 构】
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032200汾阳,山西医科大学汾阳学院,中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室,中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室,中国疾病预防控制中心病毒病预
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目的 EMCV的pEGFP-3C真核表达载体的构建及功能鉴定.方法 RT-PCR扩增EMCV功能蛋白3C基因并克隆至pEGFP-C3载体中,经双酶切和测序鉴定.将重组质粒分别转染到BHK-21细胞和293T细胞48 h后,Western-Blot检测3C蛋白酶的表达,以及对PABP1的切割,共聚焦显微镜观测3C荧光表达位置.结果 EMCV的pEGFP-3C重组质粒经双酶切及测序鉴定构建正确.表达的GFP融合蛋白相对分子质量约为49×103,可切割PABP1,并表达于细胞核内.结论 成功构建了EMCV的3C蛋白酶的真核表达载体pEGFP-3C,为进一步研究该蛋白酶的功能及作用奠定了基础。
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