【摘 要】
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目的 探讨miR-188-5p对宫颈癌细胞SiHa顺铂(DDP)化疗敏感性的影响.方法 RT-PCR检测宫颈癌细胞株SiHa、耐药细胞株SiHa/顺铂(DDP)miR-188-5p、蛋白酪氨酸磷酸酶基因(PTEN)表达量,通过TargetScan/TargertScanS预测miR-188-5p靶基因PTEN并采用双色荧光素酶实验进行验证,构建miR-188-5p过表达(mimic组)、PTEN过表达(PTEN 组)、miR-188-5p 和 PTEN 双过表达(mimic+PTEN 组)SiHa/DDP
【机 构】
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河南大学附属南阳市第一人民医院生殖医学科,河南南阳473000
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目的 探讨miR-188-5p对宫颈癌细胞SiHa顺铂(DDP)化疗敏感性的影响.方法 RT-PCR检测宫颈癌细胞株SiHa、耐药细胞株SiHa/顺铂(DDP)miR-188-5p、蛋白酪氨酸磷酸酶基因(PTEN)表达量,通过TargetScan/TargertScanS预测miR-188-5p靶基因PTEN并采用双色荧光素酶实验进行验证,构建miR-188-5p过表达(mimic组)、PTEN过表达(PTEN 组)、miR-188-5p 和 PTEN 双过表达(mimic+PTEN 组)SiHa/DDP 细胞并设置对照组(Control 组),3-(4,5)-双甲基-2-噻唑-(2,5)-二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)、5-溴脱氧尿嘧啶(BrdU)法、Transwell法、蛋白质印迹法检测DDP处理下细胞活力、增殖、侵袭能力及其相关蛋白表达.构建裸鼠移植瘤模型,比较30 d存活率和肿瘤质量,免疫组化检测肿瘤组织 Ki-67、P-糖蛋白(P-gp)蛋白表达.结果 Control组DDP的IC50值为 49.80 μmol/L、mimic 组为24.96 μmol/L、PTEN 组为58.81 μmol/L 和 mimic+PTEN 组为40.66 μmol/L.P-gp 表达 Control 组(0.020±0.010)、mimic 组(0.003±0.002)、PTEN 组(0.100±0.030)和 mimic+PTEN 组(0.015±0.007)比较差异有统计学意义,Fmimic=30.952、P=0.001,FPTEN=24.836、P=0.001,Fmimic×PTEN=13.801、P=0.006;mimic 组 P-gp 表达低于 Control 组,t=3.059,P=0.038;mimic+PTEN组P-gp表达低于PTEN组,t=4.867,P=0.008.mimic组与Control组比较,增殖阳性细胞数目、侵袭细胞数目、Ki-67、增殖细胞核抗原(PCNA)和N-钙黏蛋白(N-cadherin)蛋白表达均降低(P＜0.05),E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达升高,P＜0.05;PTEN组与Control组比较,增殖阳性细胞数目、侵袭细胞数目、Ki-67、PCNA和N-cad-herin蛋白表达均升高(P＜0.05),E-cadherin蛋白表达降低,P＜0.05;mimic+PTEN组与mimic组比较,增殖阳性细胞数目、侵袭细胞数目、Ki-67、PCNA和N-cadherin蛋白表达均升高(P＜0.05),E-cadherin蛋白表达降低,P＜0.05.Con-trol 组裸鼠存活率(46.67％)低于mimic组(86.67％),差异有统计学意义,x2=5.136,P=0.023;mimic组Ki-67阳性率C(25.67±10.48)％]低于 Control 组[(76.17±15.84)％],差异有统计学意义,t=6.512,P＜0.001;mimic 组 P-gp 阳性率[(14.83±4.96)％]低于 Control 组[(46.67±8.69)％],差异有统计学意义,t=7.796,P＜0.001;mimic 组移植瘤质量[(0.40±0.02)g]低于 Control 组[(1.70±0.06)g],差异有统计学意义,t=49.399,P＜0.001.结论 miR-188-5p 可降低P-gp蛋白表达减弱SiHa细胞DDP耐药性,抑制细胞增殖和侵袭,可能与靶向抑制PTEN表达有关.
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