枯草芽孢杆菌谷氨酰胺转胺酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

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以枯草芽孢杆菌DB104染色体DNA为模板,利用PCR技术扩增得到谷氨酰胺转胺酶基因tg,将其克隆至大肠杆菌质粒pET-22b(+)中,构建表达载体pET-tg,并转化大肠杆菌BL21(DE3)。重组菌经IPTG(异丙基B-D-硫代半乳糖苷)诱导,SDS—PAGE电泳分析,结果表明谷氨酰胺转胺酶得到了表达,表达量占菌体总蛋白的12%。诱导菌体经裂解后的上清与酪蛋白反应,显示其具有交联蛋白质的活性。经荧光法测定,诱导5h的菌体酶活为1590U/g(DCW,cell weight,细胞干重),是出发菌株30U
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