【摘 要】
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为了探讨非酒精性脂肪肝(Nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)发病机制,选用小鼠脂肪肝和离体肝原代细胞培养作为非酒精性脂肪肝模型。通过免疫印迹、逆转录-聚合酶链反
【机 构】
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南京医科大学基础医学院药理学实验室,
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为了探讨非酒精性脂肪肝(Nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)发病机制,选用小鼠脂肪肝和离体肝原代细胞培养作为非酒精性脂肪肝模型。通过免疫印迹、逆转录-聚合酶链反应、免疫共沉淀和免疫荧光检测肝脏核因子4α(Hepatocyte nuclear factor 4-alpha,HNF4-α)核质分布、转录活性和HNF4α下游脂代谢相关基因和脂代谢的表达水平。结果显示:高脂饮食诱导肝脏脂质沉积,升高脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)、棕榈酸(Palmitate,PA)和肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)的表达水平,这些因子能够激活蛋白激酶C(Protein kinase C,PKC)。PKC通过磷酸化显著抑制HNF4α下游基因微粒体甘油三酯转运蛋白(Microsomal triglyceride transfer protein,MTTP)和载脂蛋白B(Apolipoprotein B,Apo B)的转录活性,妨碍肝脏低密度脂蛋白(VLDL)的装配和甘油三酯(TG)外排。过多的甘油三酯滞留在肝脏,进一步加剧脂肪肝的发展。
In order to investigate the pathogenesis of non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD), mouse fatty liver and primary cultured hepatocytes were selected as non-alcoholic fatty liver model. Western blotting, reverse transcription-polymerase chain reaction, co-immunoprecipitation and immunofluorescence were used to detect the nuclear distribution, transcriptional activity and lipid metabolism-related genes downstream of HNF4α in HNF4-α Metabolic expression level. The results showed that high-fat diet induced hepatic lipid deposition, increased the expression of lipopolysaccharide (LPS), palmitate (PA) and tumor necrosis factor-α (TNF-α) Factor activates protein kinase C (PKC). PKC significantly inhibits the transcriptional activity of microsomal triglyceride transfer protein (MTTP) and apolipoprotein B (Apo B) downstream of HNF4α by phosphorylation, hindering the development of hepatic low density lipoprotein (VLDL) Assembly and triglyceride (TG) efflux. Excessive triglycerides remain in the liver, further exacerbating the development of fatty liver.
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