论文部分内容阅读
摘要：目的 视不同质量标本，通过规范的操作，提高痰标本结核菌培养阳性率。方法 简单法（罗氏固体培养基培养法）培养，以中国疾控中心国家结核病参比实验室、中国疾控中心结核病预防控制中心的《结核菌培养标准化操作及质量保证手册》，卫生部疾控预防控制局、中国疾病预防控制中心的《全国结核病耐药性监测实施手册》为标准做参考和比对。结果 在2013年1月至2013年12月实行的全国结核病耐药性监测中，对照《全国结核病耐药性监测实施手册》：涂阳培阴率应小于10%，污染率应小于5%。本监测点很好地控制在标准以内。合计培养阳性率53%，高于多篇文献的报道的水平。结论 本监测点按照规范操作程序和本人的实际经验相结合，使全国结核病耐药性监测这一艰巨的任务圆满完成，各项指标符合国家标准。特别是涂阴病例培养阳性比例增大，为涂阴病例增加了明确诊断的标准，为耐药监测增加了庞大的队伍，为大批患者提供了治疗的用药依据。
关键词：结核菌;培养;阳性率;标准化操作
【引言】随着中国结核病控制规划（NTP）工作不断深入，耐药结核病呈上升趋势【1】。单纯依靠基本现代结核病控制策略（DOTS）中痰涂片显微镜检查（涂片镜检）已不能满足工作需要，这对实验室工作提出了新的要求。痰标本结核菌培养既能提高结核病的诊断率[2]，而且分枝杆菌培养是目前实验室耐药性诊断的前提和重要疗效评价方法。结核菌培养是结核病细菌学检查的重要方法之一。目前在我国公共卫生领域结核菌培养开展的并不普遍。为了明确涂片阴性患者的诊断以及应对日益突出的耐药结核病问题，培养工作逐步被提上日程。而结核病实验室分枝杆菌培养检查水平参差不齐，因此，怎样规范操作以提高痰培养阳性率显得尤为迫切。
【材料和方法】
1.1方法：简单法
1.2设备材料
①Ⅱ级生物安全柜。②恒温培养箱。③涡轮振荡器。④带螺旋盖的前处理管。⑤2ml无菌刻度吸管（每份标本需要一支吸管）等等。
2.试剂：4%氢氧化钠（NaOH）溶液和酸性改良罗氏培养基
3.环境、设备、材料准备
3.1 将酸性罗氏培养管从冷藏环境取出，室温放置。
3.2 将所需材料置于生物安全柜内。
3.3启动生物安全柜，预运行3～5分钟，检查生物安全柜运行是否正常。
3.4 在生物安全柜外将病人姓名标记在前处理管上。
3.5待酸性罗氏培养基恢复至室温，擦除培养管外壁的冷凝水，在培养管斜面的背面标记姓名、实验序号、接种日期。
4.操作步骤
（1）参照《分枝杆菌分离培养标准化操作程序》。
（2）附本人的经验总结：
① 所用试剂必须在有效期内且存放于合适条件。所用试剂和材料必须无菌无毒。
② 所用设备运行正常。
③ 标本及时处理，不能及时处理的尽快放置2～8oC冰箱储存，最好不超过7天。
④ 以标本的浓稠度加入NaOH，浓稠的标本取1～2ml，加2倍的NaOH;稀薄的痰液可以取3～4ml，再加入0.5～1倍的NaOH。这样，既保证标本量，又使前处理管内的液体不要过多或过少而影响震荡液化。
碱化的时间在NaOH加入到接种最好控制在15～20分钟，时间长了，会杀死结核菌，时间短了起不到去污染的目的。
接种前处理后的痰标本，痰液脓的接种2～3滴，稀薄的接种3～5滴。一定要让痰液铺满整个培养管的斜面并保持斜面水平24小时或更长。
5.培养结果观察：
接种后第3日和第7日观察培养情况，此后每周观察一次（最好中间增加一次），直至第八周末。每次观察结果登记。一般在前二周之内出现的黄色、光滑、湿润的菌落可能为非结核分枝杆菌。如果发现培养基液化或长霉菌则报告污染。
【结果评价】
在2013年1月至2013年12月实行的全国结核病耐药性监测中，本监测点总共涂片培養有效纳入患者215例。其中培阳115例，涂阳培阴1例，，涂阴培阴99例，见表1。
表1 本监测点在2013年全国结核病耐药监测中的涂片培养结果
对照《全国结核病耐药性监测实施手册》：涂阳培阴率应小于10%，污染率应小于5%。本监测点很好地控制在标准以内。合计培养阳性率53%，高于多篇文献的报道的水平[3][4][5]。首先，我们始终叮嘱患者留取高质量的痰，好的样本是准确诊断的关键[6]。涂阴病例培养阳性数为50，占培养阳性总数的43%。为何如此多的涂阴病例培养阳性？原因：1.接收的标本绝大多数不合格，标本量不足且唾液居多，或者极少量的痰混合大量唾液，无法满足涂片质量，涂阳的概率也就降低。2.患者重新留取标本的依从性很差，所以我们收到任何标本都具体问题具体分析，按标准操作进行。3.培养时，对质量差的标本，在允许的范围内尽量增大接种量。
【结论】
本监测点按照规范操作程序和本人的实际经验相结合，使全国结核病耐药性监测这一艰巨的任务圆满完成，各项指标符合国家标准。特别是涂阴病例培养阳性比例增大，为涂阴病例增加了明确诊断的标准，为耐药监测增加了庞大的队伍，为大批患者提供了治疗的用药依据。
参考文献：
[1]Drobniewski F，Nikolayevskyy V，Maxeiner H，Balabanova Y，Casali N，Kontsevaya I，Ignatyeva O.Rapid diagnostics of tuberculosis and drug resistance in the industrialized world：clinical and public health benefits and barriers to implementation[J].BMC Med.2013，11（8）：190.
[2]何斌，贺钢枫.805例肺结核病人痰培养结果分析[J].内蒙古医学杂志，2011，43（2）：241-242.
[3]武洁.结核分枝杆菌及耐药结核分枝杆菌快速的检测研究[D].复旦大学2011.
[4]李国刚，董彬，李俊娟.运用不同实验方法提高菌阳肺结核患者检出率的实施性研究[J].河北医药，2009，31（21）：2860-2861.
[5]李秋根、刘江红、边泽源.不同检测方法对肺结核诊断价值的探讨[J].中国危重病急救医学，2002，14（9）：543-544.
[6]Sakundarno M， Nurjazuli N， Jati S，et al.Insufficient quality of sputum submitted for tuberculosis diagnosis and associated factors，in Klaten district，Indonesia[J].BMC Pulmonary Medicine 2009，9（1）：16.
作者简介：赵蓉芬，女，本科，主管检验师。
关键词：结核菌;培养;阳性率;标准化操作
【引言】随着中国结核病控制规划（NTP）工作不断深入，耐药结核病呈上升趋势【1】。单纯依靠基本现代结核病控制策略（DOTS）中痰涂片显微镜检查（涂片镜检）已不能满足工作需要，这对实验室工作提出了新的要求。痰标本结核菌培养既能提高结核病的诊断率[2]，而且分枝杆菌培养是目前实验室耐药性诊断的前提和重要疗效评价方法。结核菌培养是结核病细菌学检查的重要方法之一。目前在我国公共卫生领域结核菌培养开展的并不普遍。为了明确涂片阴性患者的诊断以及应对日益突出的耐药结核病问题，培养工作逐步被提上日程。而结核病实验室分枝杆菌培养检查水平参差不齐，因此，怎样规范操作以提高痰培养阳性率显得尤为迫切。
【材料和方法】
1.1方法：简单法
1.2设备材料
①Ⅱ级生物安全柜。②恒温培养箱。③涡轮振荡器。④带螺旋盖的前处理管。⑤2ml无菌刻度吸管（每份标本需要一支吸管）等等。
2.试剂：4%氢氧化钠（NaOH）溶液和酸性改良罗氏培养基
3.环境、设备、材料准备
3.1 将酸性罗氏培养管从冷藏环境取出，室温放置。
3.2 将所需材料置于生物安全柜内。
3.3启动生物安全柜，预运行3～5分钟，检查生物安全柜运行是否正常。
3.4 在生物安全柜外将病人姓名标记在前处理管上。
3.5待酸性罗氏培养基恢复至室温，擦除培养管外壁的冷凝水，在培养管斜面的背面标记姓名、实验序号、接种日期。
4.操作步骤
（1）参照《分枝杆菌分离培养标准化操作程序》。
（2）附本人的经验总结：
① 所用试剂必须在有效期内且存放于合适条件。所用试剂和材料必须无菌无毒。
② 所用设备运行正常。
③ 标本及时处理，不能及时处理的尽快放置2～8oC冰箱储存，最好不超过7天。
④ 以标本的浓稠度加入NaOH，浓稠的标本取1～2ml，加2倍的NaOH;稀薄的痰液可以取3～4ml，再加入0.5～1倍的NaOH。这样，既保证标本量，又使前处理管内的液体不要过多或过少而影响震荡液化。
碱化的时间在NaOH加入到接种最好控制在15～20分钟，时间长了，会杀死结核菌，时间短了起不到去污染的目的。
接种前处理后的痰标本，痰液脓的接种2～3滴，稀薄的接种3～5滴。一定要让痰液铺满整个培养管的斜面并保持斜面水平24小时或更长。
5.培养结果观察：
接种后第3日和第7日观察培养情况，此后每周观察一次（最好中间增加一次），直至第八周末。每次观察结果登记。一般在前二周之内出现的黄色、光滑、湿润的菌落可能为非结核分枝杆菌。如果发现培养基液化或长霉菌则报告污染。
【结果评价】
在2013年1月至2013年12月实行的全国结核病耐药性监测中，本监测点总共涂片培養有效纳入患者215例。其中培阳115例，涂阳培阴1例，，涂阴培阴99例，见表1。
表1 本监测点在2013年全国结核病耐药监测中的涂片培养结果
对照《全国结核病耐药性监测实施手册》：涂阳培阴率应小于10%，污染率应小于5%。本监测点很好地控制在标准以内。合计培养阳性率53%，高于多篇文献的报道的水平[3][4][5]。首先，我们始终叮嘱患者留取高质量的痰，好的样本是准确诊断的关键[6]。涂阴病例培养阳性数为50，占培养阳性总数的43%。为何如此多的涂阴病例培养阳性？原因：1.接收的标本绝大多数不合格，标本量不足且唾液居多，或者极少量的痰混合大量唾液，无法满足涂片质量，涂阳的概率也就降低。2.患者重新留取标本的依从性很差，所以我们收到任何标本都具体问题具体分析，按标准操作进行。3.培养时，对质量差的标本，在允许的范围内尽量增大接种量。
【结论】
本监测点按照规范操作程序和本人的实际经验相结合，使全国结核病耐药性监测这一艰巨的任务圆满完成，各项指标符合国家标准。特别是涂阴病例培养阳性比例增大，为涂阴病例增加了明确诊断的标准，为耐药监测增加了庞大的队伍，为大批患者提供了治疗的用药依据。
参考文献：
[1]Drobniewski F，Nikolayevskyy V，Maxeiner H，Balabanova Y，Casali N，Kontsevaya I，Ignatyeva O.Rapid diagnostics of tuberculosis and drug resistance in the industrialized world：clinical and public health benefits and barriers to implementation[J].BMC Med.2013，11（8）：190.
[2]何斌，贺钢枫.805例肺结核病人痰培养结果分析[J].内蒙古医学杂志，2011，43（2）：241-242.
[3]武洁.结核分枝杆菌及耐药结核分枝杆菌快速的检测研究[D].复旦大学2011.
[4]李国刚，董彬，李俊娟.运用不同实验方法提高菌阳肺结核患者检出率的实施性研究[J].河北医药，2009，31（21）：2860-2861.
[5]李秋根、刘江红、边泽源.不同检测方法对肺结核诊断价值的探讨[J].中国危重病急救医学，2002，14（9）：543-544.
[6]Sakundarno M， Nurjazuli N， Jati S，et al.Insufficient quality of sputum submitted for tuberculosis diagnosis and associated factors，in Klaten district，Indonesia[J].BMC Pulmonary Medicine 2009，9（1）：16.
作者简介：赵蓉芬，女，本科，主管检验师。